INVESTIGADORES
ZANETTI Flavia Adriana
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la distribución in vivo de vectores poxvirales en pollos
Autor/es:
CARDONA, R.; FEDERICO, C.; ZANETTI, F.; CALAMANTE, G.
Lugar:
Valle Hermoso, Pcia. de Córdoba
Reunión:
Encuentro; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012
Institución organizadora:
Asociaciòn Argentina de Microbiologìa
Resumen:
Los vectores poxvirales más utilizados para el desarrollo de vacunas están basados en cepas atenuadas como el virus vaccinia Ankara modificado (MVA), los virus canarypox (CNPV) o fowlpox (FWPV). En particular, los vectores basados en MVA se encuentran en diferentes fases de la evaluación para el desarrollo de vacunas humanas, mientras que existen varias vacunas veterinarias licenciadas basadas en CNPV y FWPV. Una ventaja de los vectores poxvirales es la ausencia de replicación en el hospedador, sin embargo sólo se evaluó la distribución in vivo de cepas derivadas del virus vaccinia en ratones y macacos. En nuestro laboratorio se implementaron los tres sistemas de vectores antes mencionados y se utilizan para el desarrollo de vacunas para mamíferos y aves. El objetivo de este trabajo fue evaluar la distribución in vivo de las cepas atenuadas de MVA, CNPV y FWPV en pollos certificados como libres de patógenos específicos. Los virus CNPV y MVA se inocularon por vía intramuscular en pollos de 20 u 11 días de edad, respectivamente. A distintos días post inoculación (1, 3 y 7 días) las aves se sacrificaron y se tomaron muestras de diferentes órganos (músculo, hígado, bazo y bolsa de Fabricio). Los virus CNPV y FWPV se inocularon por vía subcutánea en la membrana del ala de pollos de 25 días de edad, en los cuales se observó la formación de una lesión característica de cepas vacunales de viruela aviar (pequeña y no hemorrágica). A los 3 días post inoculación (dpi) se sacrificaron las aves y se tomaron muestras de diferentes órganos (hígado, bazo y bolsa de Fabricio). Con las muestras de los tejidos se realizaron homogenatos que se utilizaron para infectar cultivos primarios de fibroblastos de embrión de pollo (células susceptibles). Se extrajo el ADN total de las células infectadas y se realizó la amplificación por PCR de regiones genómicas correspondientes a un gen aviar o a un gen viral. En todos los casos se observó un amplicón correspondiente al gen aviar indicando que las muestras eran amplificables y no existían inhibidores de la reacción de PCR. En cambio, nunca se logró amplificar la secuencia correspondiente al gen viral indicando la ausencia de virus en las muestras provenientes del ave. Por último, los tres virus se inocularon por vía subcutánea en la membrana del ala de pollos de 7 días de edad y se evaluó la formación del nódulo en el sitio de inoculación. En el caso de CNPV y MVA los nódulos fueron de 1 mm de diámetro y desaparecieron a los 7 dpi, mientras que para FWPV se observaron lesiones de 3-5 mm que duraron 11 días y se observó la formación de costras a los 7-8 dpi. Los resultados indican que los virus evaluados no replicarían en el ave o lo harían de manera limitada, ya que si bien se observó la formación de nódulos en el sitio de inoculación, no fue posible detectar el genoma viral en otros órganos del ave.