Comparación de biorreactores vegetales para la expresión de proteínas recombinantes

PÉREZ CASTRO, CAROLINA; SEGRETIN MARIA EUGENIA; MÜLLER, CAROLINA; BRAVO ALMONACID FERNANDO; MIRKIN, FEDERICO; WIRTH, SONIA

Buenos Aires

Jornada; Jornadas Exactas y el agro: aportes a la actividad agropecuaria y agroindustrial; 2019

Facultad de ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires

Los biorreactores vegetales constituyen un sistema atractivo para la producción de distintos tipos de proteínas de interés (biopolímeros, enzimas industriales y proteínas terapéuticas) gracias a sus bajos costos de mantenimiento y fácil escalado, a los bajos riesgos de contaminación con patógenos animales y a la posibilidad de expresar proteínas con modificaciones post-traduccionales eucariotas. En este trabajo evaluamos dos sistemas vegetales de expresión de proteínas recombinantes para la producción de hFGFb (human Fibroblast Growth Factor b), un factor de crecimiento utilizado como insumo para el mantenimiento y diferenciación de líneas celulares animales in vitro. En primer lugar, evaluamos la factibilidad de utilizar la transformación del genoma de cloroplastos para expresar hFGFb. Obtuvimos tres líneas de plantas transformadas en las que se verificó la integración del transgén por PCR y la expresión de la proteína recombinante por western blot. Por otro lado, se evaluó la expresión de hFGFb en forma transitoria en plantas de N. benthamiana mediante la técnica de agroinfiltración, direccionando la proteína recombinante a distintos compartimientos subcelulares. Se adaptó el vector pEAQ [1] para generar el vector pEAQ-Golden, que permite un clonado rápido y modular mediante la estrategia Golden Gate Assembly, siendo un sistema útil para fusionar proteínas de interés a distintas secuencias de localización subcelular. Para verificar el correcto direccionamiento de las proteínas expresadas con este vector, se clonaron proteínas reporteras fluorescentes fusionadas a las señales de localización. Este sistema se utilizará para evaluar la expresión y acumulación de hFGFb en citoplasma, retículo endoplasmático, apoplasto y vacuola. Mediante la caracterización de ambos sistemas de expresión se pretende encontrar el sistema óptimo para la producción de factores de crecimiento recombinantes. Asimismo, ambos sistemas podrían ser utilizados para la expresión de otras proteínas recombinantes de uso tanto farmacéutico como industrial.