Diseño y evaluación de un protocolo para la extracción simultánea de múltiples proxies en heces: implicancias en investigaciones forenses

PETRIGH, R., ; CAMIOLO, I.; VALENZUELA, L. O.; BURRY, L.; VELÁZQUEZ N.J.; MARTÍNEZ TOSTO, C.; FUGASSA, M.; GUICHÓN, R.; BENVENUTO, L.; PALACIO P.I.; DE MIRANDA CHAVES, S.

Sao Pablo

Congreso; Paleopathology Meeting in Sudamerica (PAMinSA) VIII; 2019

Estudios sobre restos de heces halladas en escenarios forenses han mostrado la potencialidad delanálisis interdisciplinario en el esclarecimiento de casos. Estos estudios no poseen diferenciassustanciales con el análisis simultáneo de múltiples proxies de coprolitos (ADN, fragmentosvegetales, isótopos estables de carbono y nitrógeno, polen, silicofitolitos y restos parasitarios). Lametodología para el análisis de coprolitos consiste en: 1. eliminación del córtex y división ensubmuestras para extracción multiproxy; 2. defloculación y extracción con sustancias químicas; 3.concentración y observación microscópica. Este procedimiento, muchas veces, produce pérdidade muestra impidiendo la cuantificación. Con el objetivo de sumar más líneas de evidencia, sediseñó y optimizó un protocolo de procesamiento de extracción conjunta de diferentes proxies apartir de una muestra mínima de heces que resultaría aplicable para el esclarecimiento de casosen escenarios forenses. Se procesaron heces de Lama guanicoe (Familia Camelidae) recolectadasen el noroeste de Santa Cruz, Argentina (47º00?S; 72º15?O). Las siguientes consideraciones setuvieron en cuenta: la fisiología digestiva de L. guanicoe, n° de heces para procesar, composición ytiempo necesario de rehidratación de las heces, unificación de metodologías, representatividad ydistribución de cada proxy, propiedades físico-químicas de los proxies, compatibilidades de lasdiferentes soluciones utilizadas, evaluación de pérdida de diferentes proxies en cada paso, índicesde refracción de cada proxy para su observación microscópica.El protocolo multiproxy consensuado consistió en: 1. registro del peso de las heces,caracterización morfométrica y organoléptica, 2. separación y almacenamiento del córtex , 3.división en dos secciones, una para la determinación del origen por ADN, y otra para el análisis defragmentos vegetales, isótopos estables de C y N, polen, silicofitolitos y restos parasitarios, 4.registro del peso de ambas secciones, 5. adición de tableta de esporas de Lycopodium clavatum yrehidratación con fosfato trisódico acuoso 0.5% a 4°C por 5 días, 6. agitación, 7. filtraciónutilizando malla de 250 μm, 8. recuperación de los restos retenidos en la malla mediante lavadoscon PBS 1X para el análisis microhistológico, de silicofitolitos e isótopos de C y N, 9. centrifugacióna 1500 rpm por 10 min, 10. realización de preparados con aceite de inmersión para la observaciónmicroscópica de silicofitolitos y restos parasitarios, 11. extracción polínica mediante acetólisis, 12.realización de preparados semipermanentes.Se confirmó origen zoológico de las heces y se determinó presencia de ADN necesario para elanálisis. Se almacenó la muestra para el análisis de isótopos estables. Se reconocieron fragmentosvegetales a nivel específico de Poaceae, Juncaceae y Apiaceae. Se identificaron silicofitolitos dePoaceae (Pooideae y Stipoideae) y especies dicotiledóneas. Se observaron tipos polínicosarbóreos (Nothofagus), arbustivos (Empetrum y Mulinum) y herbáceos (Caryophyllaceae yPoaceae). Por último, se registraron huevos de nematodes Capilláridos. El análisis permitiósustentar la identificación del origen zoológico por ADN, determinar items de dieta a diferenteresolución taxonómica, inferir el rango de acción y registrar parasitosis en guanacos. Esteprotocolo multiproxy podría ser considerado para la definición del contexto forense y sumar evidencias para resolver casos judiciales.