Ectopeptidasas en tracto digestivo de crustáceos decápodos: modulación de la actividad de N-aminopeptidasa por ácido absicico (ABA) y calcio (Ca++) en Neohelice granulata

MICHIELS, M.S.; DALEO, G.R.; LÓPEZ MAÑANES, A,A.

Encuentro; XIII Encuentro Biólogos En Red; 2018

La N-aminopeptidasa (APN) es una enzima proteolítica multifuncional unida a la membrana celular, con el sitio catalítico expuesto a la superficie extracelular. En tracto digestivo de mamíferos, está involucrada en los pasos finales de la digestión proteica; en mecanismos de señalización; en modulación del metabolismo y sistemas de transporte de membrana y es blanco de toxinas y fármacos. Faltan estudios de modulación en tracto digestivo de grupos de importancia ecológica como cangrejos eurihalinos. El ácido abscísico (ABA) está presente en varios invertebrados y mamíferos siendo sintetizado y liberado por diferentes tipos celulares. A pesar de su rol en la modulación de varios procesos metabólicos son escasas las evidencias acerca de su posible efecto sobre la actividad de enzimas clave en tracto digestivo (ej APN). Estudiamos el efecto in vitro de ABA y Ca++ extracelular sobre APN en hepatopáncreas de N. granulata. Machos adultos fueron mantenidos a 35? de salinidad, fotoperíodo 12 h, y alimentación controlada. Secciones de hepatopáncreas se incubaron sin (control) ó con ABA ó Ca++ (10-7-10-2 M) ó ABA+ Ca++ (10-4 M) (100 mg de tejido/ 2 ml de medio de incubación (mM): 400 NaCl, 13 KCl, 10 MgCl2 8,8 H3BO3, pH 7,6, 30ºC). A los 60 min se midió la actividad de APN en el tejido (buffer homogenización: Tris-HCl 0,1M pH 7,4 4mlxg-1). APN (μmoles x min-1 x mgproteína-1) se cuantificó por hidrólisis de L-alanina-p-nitroanilida en Tris/HCl50mM a 45ºC pH 7,4. ABA ó Ca++ indujeron un incremento dosis-dependiente de APN (actividad a 10-4 M: 55% y 51%, del control (1,73), respectivamente). ABA + Ca++(10-4 M) indujeron un aumento similar. Los resultados que muestran la modulación in vitro de APN por ABA y Ca++ extracelular sugieren la regulación por diferentes vías y el rol del ABA en la modulación por efecto directo de enzimas claves en hepatopáncreas de cangrejos eurihalinos.