INTECIN   20395
INSTITUTO DE TECNOLOGIAS Y CIENCIAS DE LA INGENIERIA "HILARIO FERNANDEZ LONG"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Optimización de la preparación de agregados enzimáticos entrecruzados (CLEAs) de la lipasa de Candida antarctica B (CALB)
Autor/es:
M.P. GUAUQUE TORRES; M.L. FORESTI; M.L. FERREIRA
Lugar:
La Plata
Reunión:
Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones (SAByB)
Resumen:
La técnica de preparación de agregados enzimáticos entrecruzados (CLEAs) implica la precipitación por cambios en la constante dieléctrica o la fuerza iónica del medio y posterior entrecruzamiento con una molécula bifuncional como glutaraldehido (Glut) [1]. La técnica basada en la precipitación proteica permite obtener biocatalizadores con alto porcentaje de enzima pero posee problemas de transferencia de masa justamente por las moléculas de enzima que pueden quedar atrapadas en el interior del CLEA sin acceso al sustrato [2]. En el presente trabajo se evaluó el comportamiento de CLEAs sintetizados con la lipasa de Candida antárctica B (CALB) usando albúmina sérica bovina (BSA) como proteína de co-precipitación y cantidades variables del entrecruzante (Glut). Se efectúo una modificación al proceso convencional de preparación de CLEAs, cambiando el orden de agregado de reactivos para potenciar la precipitación y entrecruzamiento de BSA como núcleo del CLEA con posterior adición de CALB para mejorar su disponibilidad en reacción. La cuantificación del porcentaje de actividad recuperada en la reacción de síntesis de Etiloleato se realizó siguiendo los pasos desarrollados previamente en nuestro grupo que implican la comparación de la actividad específica del CLEA con la actividad específica de la enzima libre. También se observó la importancia de medición de actividad en rangos lineales de Tiempo Vs Actividad y Actividad Vs Concentración de lipasa. [3]. En las condiciones evaluadas, se obtuvo un porcentaje de actividad recuperada máxima de 190% con respecto a CALB en su forma nativa con la adición de 50mg Glut (25% p/v). Así mismo se evaluó el porcentaje de actividad recuperada con 40 y 60 mg de Glut y en todos los casos, el fenómeno de hiperactivación se mantuvo. Este fenómeno podría indicar una mejor disponibilidad de la lipasa en el CLEA para la reacción de esterificación.