Optimización en el aislamiento y purificación de capsaicina a partir de Capsicum annum L.

ACOSTA MC; RODRÍGUEZ BJ; AGNESE AM; VALLEJO MG

Córdoba

Jornada; XXII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Los pimientos picantes se usan en todo el mundo como condimento debido a su sabor pungente. En el uso popular se les atribuyen diversas propiedades medicinales, entre ellas está científicamente comprobada la efectividad de los capsaicinoides en el alivio de dolores musculares. Estos pimientos pertenecen a un grupo de plantas nativas de América del género Capsicum (Solanaceae). En Argentina crecen naturalmente Capsicum baccatum L. y C. chacoense Hunz. Su típico sabor picante se debe a la presencia de capsaicinoides, de los cuales la capsaicina (C) es el más abundante. Tanto su biosíntesis como la acumulación en los tejidos del fruto son rasgos genéticamente determinados y regidos exclusivamente por un gen llamado Pun 1 que, en estado dominante sintetiza una enzima involucrada en el último paso de la formación de C. En el marco de unproyecto en cooperación que propone el estudio de la variabilidad Intraespecífica de C en poblaciones silvestres de C. chacoense y las causas que la producen, en una 1° etapa, y como objetivo de este trabajo, se aisló y purificó C a partir de C. annum L. a fin de obtener materia prima de fuente natural para posteriores determinaciones analíticas. Se extrajeron los frutosmediante maceración con etanol, el extracto se concentró a presión reducida y se analizó por cromatografía en capa delgada (CCD), a fin de detectar la presencia de C por comparación de los datos cromatográficos con bibliografía. Luego, el extracto etanólico fue separado mediante cromatografía en columna empleando un gradiente de Etanol /Éter etílico (100%à0%; 0%à100%) usando como fase estacionaria Sílica gel. Mediante CCD se detectaron los capsaicinoides en las fracciones 10 a 16. Éstas se analizaron primero por HPLC a escala analítica, empleando una columna Hypersil C18 y como fases móviles:agua/acetonitrilo (90:10) conteniendo ácido fórmico al 0.1% (Fase A) y agua/acetonitrilo (10:90) (Fase B) con un flujo de 1mL/min. El programa empleado fue el siguiente: 0-55%B (0-21min), 55-64%B (21-30min), 64-100%B (30-35min), 100%B (35-50min), 100-0%B (50-52min) y 0%B (52-70min). Este programa es una adaptación y optimización de otros sistemas ya descriptos en trabajos anteriores; así, se verificó el tR de C. Posteriormente se procedió a su aislamiento mediante HPLC semipreparativa, con iguales condiciones, pero con columna Hypersil 5 C18, flujo de 3mL/min y volumen de inyección de 100μL. En ambos casos λ fue de 282 nm. Como resultado, pudieron aislarse los capsaicinoides de los demás componentes del extracto y C del resto de los capsaicinoides, merced a las modificaciones realizadas. Estos resultados presentan a nuestra metodología como una variación positiva y constituyen un paso hacia el estudio de las poblaciones de C. chacoense silvestres.