Inhibición de acetilcolinesterasa por parte de N-demetilsauroxina y su combinación con Huperzina A

ORTEGA, M.G.; MACIAS, C. DEL V.; VALLEJO, M.G.; BIRRI, M.A.; AGNESE, A.M.

Esquel

Jornada; V Jornadas de Plantas Arómaticas Nativas y I Jornadas de Plantas Medicinales Nativas; 2016

UNPSJB

En anteriores trabajos, hemos reportado la actividad inhibitoria sobre la enzima acetilcolinesterasa (AChE) del extracto alcaloidal (EA) de Phlegmariurus saururus (Lam.) B. Øllg. [ex Huperzia saururus (Lam.) Trevis.] (Lycopodiaceae) y de los alcaloides (ACs) aislados1,2. Recientemente, demostramos un importante incremento en la inhibición de la AChE cuando se combinan dos o más ACs, sugiriendo un efecto sinérgico entre ellos. Entre los ACs considerados minoritarios del EA, N-demetilsauroxina (NdSx) también fue estudiada respecto a su combinación con uno o más ACs mayoritarios, ejerciendo estas combinaciones siempre un efecto mayor al de los ACs aislados3. Por otra parte, Huperzina A (HupA) es un potente inhibidor de la enzima, y aparece como traza en el EA, estando sólo presente en ciertas estaciones del año en la especie, sin su presencia modifique significativamente la inhibición de la enzima por parte de EA. Con el fin de continuar con los estudios de sinergismo entre estos ACs, en el presente trabajo se evaluó el efecto sobre la AChE de diferentes combinaciones de NdSx y HupA. Se utilizó el método de Ellman adaptado para la medición en un lector ELISA, empleando salicilato de fisostigmina (CI50 0,005 μg/mL) como control positivo. En primer lugar, se evaluó la actividad de NdSx y HupA, inmediato al inicio de la reacción y luego de 30 minutos de incubación con la enzima (t=30), a fin de obtener el valor de sus CI50 bajo estas condiciones experimentales. Posteriormente, se prepararon las combinaciones de acuerdo a la tabla, a fin de establecer el efecto inhibitorio conjunto. Para el cálculo de las inhibiciones individuales y de las combinaciones así como del efecto obtenido, evaluado a través del índice de combinación (CI), se empleó el programa CompuSyn. Si CI1, antagonismo. Como resultados, se obtuvo mediante esta metodología que NdSx inhibe a la enzima a t=0, CI50= 0,35 μg/mL, y a t=30, CI50= 0,20 μg/mL. Para HupA en tanto, se obtuvieron los siguientes datos: t=0, CI50= 0,016 μg/mL y a t=30, CI50= 0,011 μg/mL Como conclusión, se observó que NdSx, al igual que EA (t=0; CI50=0,38 μg/mL; t=30, CI50=0,18 μg/mL) inhibe de forma inmediata a la AChE, y luego de los 30 min, presentando una importante acción, cercana al nivel del extracto. De ese modo, podría establecerse una nueva hipótesis acerca de la potencia del extracto, explicada a través de la acción demostrada para NdSx. En cuanto a las combinaciones de NdSx con HupA, se puede concluir que a concentraciones bajas de ambos ACs, existiría un efecto sinérgico moderado (CI=0,81). Nuevos experimentos serán desarrollados a fin determinar si existe sinergismo, indiferencia o antagonismo en otras combinaciones de ACs.