Combinación de antifúngicos y terapia fotodinámica antimicrobiana sobre biofilms de Candida tropicalis.

J MARIONI, JL CABRERA, S NÚÑEZ MONTOYA, MG PARAJE.

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

ALAM-CAM

Candidatropicalis es uno de los patógenos más frecuentemente aislado que causainfecciones fúngicas con capacidad de formación de biofilm. Previamentedemostramos que rubiadina (AQ1) y rubiadina éter 1-metil (AQ2), dosantraquinonas fotosensibilizantes aisladas de Heterophyllaea pustulata,presentan acción fotodinámica in vitro sobre biofilms de C. tropicalis. Esteefecto está directamente relacionado al estrés oxidativo y nitrosativo. Con elfin de optimizar la acción antifúngica, se estudió la combinación de estas AQsentre sí y de cada una con anfotericina B (ANFB), evaluando el efecto de lairradiación, y la generación de especies reactivas del oxígeno (ERO) ynitrógeno (ERN) como parte del mecanismo de acción.La cuantificación del biofilms se realizó por el método de O´Toole. Lacombinación de los compuestos se realizó mediante el método del tablero deajedrez en microdilución. Se trabajó a concentraciones: SubCIM, CIM y SupraCIM.El ensayo se realizó en oscuridad e irradiación con lámpara actínica (15 min).Se determinó adición y sinergismo calculando el Índice de ConcentraciónInhibitoria Fraccional (FICI). El sobrenadante fue separado para medir laproducción de anión superóxido por la reacción de Nitro-Blue tetrazolio (NBT),y la generación de óxido nítrico por Griess. La capacidad antioxidante totaldel sistema a través del ensayo FRAP (Ferrous Reduction Antioxidant Potency) yla activación de la enzima superóxido dismutasa por el ensayo NBT tambiénfueron estudiados.Ambas AQs sólo poseen actividad antibiofilm cuando son fotosensibilizadas, AQ1produce un 63.5% de reducción (%R) a la SupraCIM, y AQ2 47 %R a la CIM. ANFBproduce un 61.1%R a la CIM. Para las combinaciones de AQs con ANFB en oscuridadse observó indiferencia (FICI > 1). Sin embargo, bajo la acción de la luz,se demostró sinergismo parcial (FICI = 0,75; 65 %R) para la combinación de AQ1SubCIM y ANFB SubCIM; y adición (FICI = 1, 73 %R) para la combinación AQ2SubCIM y ANFB SubCIM. Las combinaciones de ambas AQs sólo fueron activas bajoirradiación, alcanzándose sinergismo parcial cuando se combinaron a la SubCIM(FICI = 0,75, 74%R). Todas estas combinaciones produjeron incrementossignificativos en los niveles de ERO y ERN, con la consecuente activación delos sistemas antioxidantes (enzimáticos y no enzimáticos).Estos resultados sugieren que ambas AQs fotoactivadas podrían utilizarse hastaen concentraciones SubCIM para potenciar la actividad de ANFB sobre biofilms deC. tropicalis, como así también combinadas entre sí. Por lo tanto, podríanllegar a tener aplicación en la Terapia Fotodinámica Antimicrobiana (TFDA) parael tratamiento de biofilms de C. tropicalis. En conclusión, el desbalance delos sistemas de defensa antioxidante junto con la TFDA, podría ser una nuevaestrategia para mejorar la actividad de los agentes antifúngicos con capacidadde generar ROS, convirtiéndose en una alternativa para el desarrollo detratamientos antifúngicos más eficaces.