Una metaloproteinasa del veneno de una serpiente afecta la expresión local de proteínas claves del sistema hemostático

MARÍA ELISA PEICHOTO; MATÍAS NICOLÁS SÁNCHEZ; OSCAR DANIEL SALOMÓN; MARCELO LARAMI SANTORO

Santa Fe

Congreso; III Congreso de Bioquímicos del Litoral y XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Colegio de Bioquímicos de Santa Fe y Asociación Argentina de Microbiologí­a

Philodryas patagoniensis (Colubridae) es una serpiente opistoglifa con glándulas de veneno bien desarrolladas, que se encuentra extensamente distribuida en América del Sur y en especial en Argentina. En la región nordeste de Argentina, P. patagoniensis es una de las serpientes más frecuentes en áreas abiertas. Existen varios reportes de envenenamientos causados por la mordedura de esta culebra, siendo sus signos y síntomas locales muy similares a aquellos producidos por mordeduras de especies de Bothrops (yararás). Patagonfibrasa es una metaloproteinasa de la clase P-III aislada a partir del veneno de esta culebra. Teniendo en cuenta que esta enzima es un componente prominente del veneno, y como tal debe jugar un rol clave en la patogénesis de los disturbios que ocurren en los envenenamientos por P. patagoniensis, este estudio se llevó a cabo con el fin de determinar si patagonfibrasa afecta la expresión local de dos proteínas que cumplen roles importantes en la hemostasia y la inflamación: el factor tisular (TF) y la isomerasa de puentes disulfuro (PDI). Así, ratas Wistar macho adultas fueron inyectadas s.c. con patagonfibrasa (60 μg/kg). Como control negativo se utilizaron animales inyectados con solución salina. Después de 3 h de la inoculación, se anestesiaron los animales, y se colectaron muestras sanguíneas para determinación de parámetros hemostáticos. Asimismo, se tomaron fragmentos circulares de piel de 4 cm de diámetro ? cuyo centro correspondió al sitio de la inyección -, los cuales se usaron para evaluar la expresión de TF y PDI mediante Western blotting (WB) e Inmunohistoquímica (IQ), usando anticuerpos monoclonales anti-TF y anti-PDI. De este modo se constató que patagonfibrasa no alteró el contaje de ningún tipo celular sanguíneo, así como tampoco los niveles de fibrinógeno plasmático. Además, esta enzima no modificó la actividad de TF en plasma. Sin embargo, mediante WB semicuantitativo, se comprobó que patagonfibrasa incrementa la expresión de TF (2 veces frente al control), pero disminuye la expresión de PDI (3 veces frente al control) en las muestras de piel de rata analizadas. Al evaluar la detección de TF mediante IQ en cortes de piel de rata - fijados en solución de paraformaldehído y posteriormente embebidos en parafina -, se observó una expresión prominente de TF en el tejido subcutáneo, el cual probablemente se corresponde con TF extracelular contenido en pequeñas vesículas que se unen a plaquetas activadas. En conclusión, este trabajo reporta por primera vez la alteración local de 2 proteínas implicadas en el proceso hemostático por la inyección de una metaloproteinasa del veneno de una serpiente. Es importante destacar que la expresión aumentada de TF podría contribuir a las reacciones inflamatorias locales que se presentan frecuentemente en los accidentes ofídicos, principalmente aquellos ocasionados por especies de yararás y de culebras. Así, teniendo en cuenta que los sueros antiofídicos poseen efectividad baja y limitada para contrarrestar la actividad local de los venenos, se podría pensar que la modulación de la actividad de TF pueda usarse como una estrategia terapéutica recomendada para los casos de envenenamiento local por serpientes.