Producción biotecnológica en larvas de insectos de las principales toxinas del veneno de Lonomia obliqua

JOAQUÍN M. BIRENBAUM; LUCIA F. MOURA; IGNACIO SMITH; LUCIANO MONTERO; LEONARDO G. ALONSO; JOAQUÍN POODTS; SOL M. RODRIGUEZ; MICAELA A. GRITTI; ALEXANDRA M. TARGOVNIK; MARÍA E. PEICHOTO; MARÍA V. MIRANDA

Buenos Aires

Jornada; Aportes de la FCEN y la FFyB (UBA) al desarrollo de nuevas herramientas terapéuticas y de diagnóstico; 2022

Los envenenamientos causados por artrópodos venenosos tales como arañas, escorpiones ylepidópteros son un problema sanitario emergente en las áreas rurales principalmente.Lonomia obliqua es un lepidóptero venenoso perteneciente a la familia Saturniidae. Elcontacto con las espículas de la oruga de esta especie causa un dolor instantáneo en la zona decontacto. El cuadro clínico puede evolucionar a una coagulopatía con hemorragias y,eventualmente, falla renal y muerte del individuo. El único tratamiento existente en el mundopara contrarrestar las complicaciones sistémicas de este envenenamiento es el antivenenoLonomia producido por el Instituto Butantan de Brasil, el cual es producido en caballoshiperinmunizados con el veneno obtenido a partir de las espículas de la oruga de L. obliqua. EnArgentina no se dispone de un recurso terapéutico propio y efectivo para dar respuesta a esteevento de Salud Pública.La proteína activadora de protrombina (LOPAP) y la proteína activadora del Factor X (LOSAC)son dos componentes muy importantes del veneno de L. obliqua, siendo responsables de losprincipales disturbios hemostáticos causados por el mismo en el ser humano. El objetivo delpresente trabajo fue desarrollar un proceso biotecnológico basado en el sistema BaculovirusLarvas de insecto para producir ambas toxinas recombinantes para su potencial aplicacióncomo inmunógenos en reemplazo del veneno en la producción nacional de un antivenenoLonomia.LOPAP y LOSAC fueron expresadas en larvas de último estadio de Rachiplusia nu y Spodopterafrugiperda. Los baculovirus recombinantes contenían bajo el promotor de poliedrina el gen decada toxina fusionado a una etiqueta de histidinas. El rendimiento alcanzado por gramo delarva en S. frugiperda fue de 54,5 ug para LOSAC y de 46,9 ug para LOPAP. Las larvas fueronprocesadas y las proteínas recombinantes purificadas mediante Cromatografía de Afinidad deIones metálicos inmovilizados (IMAC). Las fracciones de elución fueron estudiadas porCromatografía Liquida de Alta Resolución en Fase Reversa (RP-HPLC) y el grado de purezaalcanzado fue de 85,6% para LOSAC y 70% para LOPAP. Ambas toxinas recombinantespurificadas demostraron tener actividad procoagulante sobre plasma humano y, además,fueron eficientemente reconocidas por el antiveneno de Lonomia producido por el InstitutoButantan de Brasil. Los resultados permiten concluir que el proceso de producciónbiotecnológico de LOSAC y LOPAP en larvas de insectos fue eficiente, abriendo la oportunidadde su utilización para suplementar o reemplazar al veneno L. obliqua en la producción delantiveneno.