Expresión de cruzipaína madura activa en el sistema baculovirus-células de insecto.

VANINA ALVAREZ; FABIOLA PARUSSINI; JUAN JOSÉ CAZZULO

Huerta Grande, Córdoba

Congreso; VI Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias y VII Reunión de Redes de Laboratorio ANLIS-MALBRÁN. SAP 2000; 2000

Sociedad Argentina de Protozoología

La cruzipaína (Cr) es la principal cisteína proteinasa (CP) de Trypanosoma cruzi. La Cr madura consta de un dominio catalítico, con alta homología con CPs de la familia de la papaína, y un dominio C-terminal (CT) que caracteriza a las CPs de Tipo I de Trypanosomátidos. Si bien se conoce la estructura 3-D de una forma truncada del dominio catalítico (cruzaína), no hay hasta ahora datos estructurales sobre el CT y la relación entre ambos dominios. Ello se debe en buena medida a que hasta ahora no había sido posible expresar Cr activa conteniendo el CT, pues el mismo es procesado por los sistemas bacterianos, probablemente por la falta de modificaciones post-traduccionales. Hemos expresado Cr en el sistema eucariótico de células de insecto (Sf21) - baculovirus, que permite en general, altos niveles de expresión heteróloga con plegamiento y localización correctos. Lisados de células infectadas con el baculovirus recombinante, estudiados por SDS-PAGE seguido de Western blot, mostraron una única banda reconocida por el suero anti-Cr natural, con un Mr similar. Geles de SDS-PAGE con gelatina incorporada indicaron una única banda de actividad, también con movilidad similar a la de la Cr natural. La Cr recombinante fue purificada por cromatografía de quelatos metálicos, y está siendo caracterizada en comparación con la enzima natural. Toda la evidencia obtenida sugiere que la Cr recombinante contiene el CT, y puede esperarse, por lo tanto, que sea utilizable para intentar su cristalización y determinación de estructura 3-D.