Expresión de cruzipaína madura activa en el sistema baculovirus-células de insecto.

VANINA ALVAREZ; FABIOLA PARUSSINI; JUAN JOSÉ CAZZULO

Viña del Mar

Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular. SAIB 2000; 2000

Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de Chile. Sociedad de Biología Celular de Chile. Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular. Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular.

La cruzipaína (Cr) es la principal cisteína proteinasa (CP) deTrypanosoma cruzi. La Cr madura consta de un dominio catalítico, conalta homología con CPs de la familia de la papaína, y un dominioC-terminal (CT) que caracteriza a las CPs de Tipo I deTrypanosomátidos. Si bien se conoce la estructura 3-D de una formatruncada del dominio catalítico (cruzaína), no hay hasta ahora datosestructurales sobre el CT y la relación entre ambos dominios. Ello sedebe en buena medida a que hasta ahora no había sido posible expresarCr activa conteniendo el CT, pues el mismo es procesado por lossistemas bacterianos, probablemente por la falta de modificacionespost-traduccionales. Hemos expresado Cr en el sistema eucariótico decélulas de insecto (Sf21) - baculovirus, que permite en general, altosniveles de expresión heteróloga con plegamiento y localizacióncorrectos. Lisados de células infectadas con el baculovirusrecombinante, estudiados por SDS-PAGE seguido de Western blot,mostraron una única banda reconocida por el suero anti-Cr natural, conun Mr similar. Geles de SDS-PAGE con gelatina incorporada indicaron unaúnica banda de actividad, también con movilidad similar a la de la Crnatural. La Cr recombinante fue purificada por cromatografía dequelatos metálicos, y está siendo caracterizada en comparación con laenzima natural. Toda la evidencia obtenida sugiere que la Crrecombinante contiene el CT, y puede esperarse, por lo tanto, que seautilizable para intentar su cristalización y determinación deestructura 3-D.