Identificación y purificación de isoformas de membrana de la cruzipaína en T. cruzi.

FABIOLA PARUSSINI; VILMA G. DUSCHAK; JUAN JOSÉ CAZZULO

Cordoba

Congreso; XXXIII Reunión Anual de Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas y Biología Molecular; 1997

Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular

La cruzipaína es la cisteína proteinasa principal presente en el Trypanosoma cruzi. Su expresión esta regulada durante el desarrollo y diferenciación, siendo los niveles en epimastigotes entre uno, y dos ordenes de magnitud mas altos comparados con las otras formas del parásito. Se localiza principalmente en los lisosomas y endosomas del parásito. Recientemente, mediante inmunomicroscopía electr6nica se ha sugerido que la misma también podría estar localizada en la superficie de epimastigotes, amastigotes y formas de transici6n tripomastigotes/amastigotes. El objetivo de este trabajo fue confirmar la presencia de isoformas de la enzima unidas a la membrana plasmática del parasito. Se identificaron en epimastigotes isoformas anfifílicas de la cruzipaína despues de la extracci6n con el detergente Trit6n X-114 y posterior separaci6n de fases. Las mismas se purificaron por afinidad a Concanavalina A sugiriendo que presentan en su composición oligosacáridos de alta manosa y a Cistatina confirmando su naturaleza de cisteína proteinasa. Se estudio su distribución en fracciones subcelulares obtenidas por centrifugacion diferencial y se determinó que están concentradas en la fracción microsomal. Esta fracci6n contiene principalmente vesículas de membrana plasmática de epimastigotes. Por último se marcaron superficialmente parásitos vivos con sulfo-NHS-biotina y se purificaron las isoformas anfifílicas mediante Cistatina-Sefarosa e inmunoafinidad comprobándose que las mismas estaban biotiniladas. Se extendieron los estudios a las otras formas de desarrollo del parásito confirmando la presencia de isoformas anfifílicas de la cruzipaína con diferentes movilidades electroforéticas.