INVESTIGADORES
DELGADO osvaldo Daniel
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización del aislamiento Fusarium oxisporum LY46.2 y de su actividad antimicrobiana, aislado de la Eco-región de Las Yungas.
Autor/es:
WERNING ML; ARNAU VG; DELGADO OD; FARIÑA JI
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Micologia; 2014
Institución organizadora:
Asociacion Argentina de Micologia
Resumen:
Numerosos compuestos con
actividad biológica han sido aislados de microorganismos pertenecientes a los
dominios Archaea, Bacteria y Eucarya, entre los que se incluyen: antibióticos,
toxinas, pesticidas, herbicidas, antiparasitarios, hormonas, factores de crecimiento,
antioxidantes, biosurfactantes, etc.; los que han servido de sustento a la
biotecnología microbiana. En el área de la medicina, el desarrollo de nuevos
antibióticos se ha convertido en una prioridad a causa de la frecuente
aparición de bacterias patógenas resistentes a los antimicrobianos
convencionales. Para hacer frente a este problema, una estrategia que ha ganado
atención en los últimos años es la bioprospección, tendiente a la búsqueda
directa de metabolitos de importancia biotecnológica a partir de aislamientos
microbianos provenientes de ambientes naturales con características
particulares, de acuerdo al metabolito de interés. Bajo esta premisa, se
aislaron más de 100 especímenes de hongos filamentosos con actividad
antimicrobiana a partir de muestras procedentes de la Eco-región de Las Yungas,
Tucumán. En el presente trabajo, se llevó a cabo la caracterización de unos de
estos aislamientos (LY46.2), así como también de su actividad antimicrobiana.
Las características macro- y micro-morfológicas
del aislamiento LY46.2, mediante inspección visual de las colonias en
diferentes medios de cultivo así como la observación microscópica, mostraron
concordancia con lo reportado en la literatura para Fusarium oxysporum. Además
se llevó a cabo la identificación molecular mediante del análisis de secuencia
de la región del ADNr 18S; ITS1; 5.8S; ITS2; y dominio D1/D2 del ADNr 28S
revelando 100% de identidad con Fusarium oxysporum sp. melonis HKU 956. La
recuperación y
purificación del antimicrobiano se llevó a cabo a partir del sobrenadante libre
de células de un cultivo a escala de laboratorio. La producción de actividad antimicrobiana se
ensayó en diferentes medios de cultivo y se seleccionó el medio papa glucosado
para llevar a cabo el aislamiento y purificación del compuesto antimicrobiano.
El mismo se purificó y concentró por extracción en fase sólida en columnas C18. La pureza de la fracción con actividad
antimicrobiana se chequeó por HPLC a escala analítica en columna C18.
La actividad antimicrobiana del compuesto purificado se evaluó por el método de
difusión en placa usando como cepa testigo Salmonella enterica ser. Enteritidis
ACC PA03 (seleccionado entre otras cepas patógenas Gram(-) a las que inhibió
LY46.2). El cromatograma de HPLC
reveló la presencia de un pico mayoritario y dos minoritarios, aunque solamente
el pico mayoritario mostró actividad antimicrobiana. Finalmente, empleando
membranas de diálisis de diferentes cut-off se estimó que el antimicrobiano,
que podría tratarse de un metabolito secundario, posee un peso molecular <
6.000 Da, presentando además carga neta negativa a pH 8,0.