Canales de cloruro en una línea celular derivada de trofoblasto humano (BeWo)

MARINO, G.; DEL MÓNACO, S.; ASSEF, Y.; KOTSIAS

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIII Reunión SAIC; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El canal de cloruro CFTR y el canal epitelial de sodio (ENaC) se localizan en la membrana apical de epitelios absortivos y se encargan del balance hidroelectrolítico en los mismos. El sinciciotrofoblasto (SCT) contiene transportadores de Na+ y Cl- que participan en la nutrición del feto y en el mantenimiento de la homeostasis celular. El CFTR fue descripto en SCT de placenta humana y hemos evidenciado la expresión del ENaC en este tejido y en la línea celular BeWo, derivada de trofoblasto humano. El objetivo del presente trabajo es caracterizar el transporte de Cl- en células BeWo, utilizando técnicas electrofisiológicas y de biología molecular. Mediante la técnica de patch clamp en la configuración de célula entera, detectamos corrientes de Cl- con una conductancia saliente macroscópica de 24.5 ± 5.9 pS/pF, determinada entre 0 y 100 mV (n=6). Las corrientes fueron normalizadas por la capacitancia de membrana, cuyo valor promedio fue 41.0 ± 20.2 pF. Estos datos se correlacionaron con los obtenidos a partir de registros de canal único, utilizando la configuración inside-out de patch clamp, donde hemos identificado dos tipos de canales de Cl- . Uno que presentó una conductancia intermedia de 73.8 ± 33.0 pS (n=3) y el otro de corrientes más pequeñas con una conductancia de 13.1 ± 8.5 pS (n=2). La baja conductancia del segundo tipo de canal sería compatible con la observada para canales tipo CFTR estudiados en otros sistemas. Mediante estudios por RT-PCR del canal CFTR en las células BeWo observamos la banda esperada a ~295 pb y por Western blot detectamos la banda típica de ~160 KDa que nos permitió confirmar que el CFTR se expresa en las células BeWo. Concluimos que las células BeWo, utilizadas como modelo de trofoblasto humano, expresan canales de cloruro funcionales. Nuestros Resultados serían un aporte al conocimiento del transporte de cloruro y su relación con el de sodio en tejidos placentarios.