INVESTIGADORES
MARANI mariela Mirta
congresos y reuniones científicas
Título:
Empleo de la técnica de DGGE para la selección de insertos en la identificación de prepro-péptidos presentes en la piel de Boana pulchella (Anura: Hylidae)
Autor/es:
AGUILAR S.; BRUNETTI ANDRÉS E.; PÉREZ LUIS O.; CANCELARICH NATALIA L.; BASSO NÉSTOR G.; MARANI MARIELA M.
Lugar:
Puerto Madryn
Reunión:
Jornada; 8a Jornada de Becarixs CONICET-CENPAT; 2018
Institución organizadora:
CCT CONICET-CENPAT
Resumen:
Los anfibios poseen en su piel una de las fuentes más abundantes de péptidos antimicrobianos (PAMs), los que constituyen un componente esencial en la defensa inmunológica contra la proliferación de microorganismos. El objetivo de este trabajo fue la evaluación de la técnica de electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización (DGGE) como método adicional de selección de insertos de PAMs clonados para su posterior identificación, análisis, comparación con secuencias ya existentes y evaluación de su actividad. Para ello, se extrajo el ARNm de la piel de un espécimen adulto de Bpc, se sintetizó su cDNA y se amplificó por PCR. Los productos fueron clonados en células competentes. Se aislaron 37 colonias y se seleccionaron 17 insertos de acuerdo a la evaluación de sus tamaños utilizando electroforesis en gel de agarosa y la técnica de DGGE. Se obtuvieron 5 nuevos prepro-péptidos cuyos péptidos maduros presentaron carga neta positiva, PM entre 1870 y 1996 Da y una conformación de tipo α-hélice. Estas secuencias contienen a seis de los péptidos previamente identificados en la secreción de la piel de Bpc, lo que sugiere un proceso de degradación y/o clivaje específico enzimático una vez que han sido secretados. Las alineaciones con secuencias obtenidas en The Antimicrobial Peptide Database revelaron que 3 de los péptidos comparten más del 50% de similitud con péptidos miembros de la familia Hylin, identificados en anfibios del mismo género, y 2 presentan una similitud mayor al 40% con PAMs descritos en otros géneros de anfibios. Losresultados indican que la técnica de DGGE resultó útil como método adicional para la selección de insertos. Los nuevos PAMs identificados presentan características prometedoras. Se espera que los mismos presenten actividad contra cepas Gram positivas y Gram negativas, por lo que ya se ha realizado la síntesis química y actualmente están siendo purificados para evaluar su actividad antimicrobiana, hemolítica y citotóxica.