INVESTIGADORES
MARANI mariela Mirta
congresos y reuniones científicas
Título:
Biosensor de resonancia plasmática de superficie para evaluar la afinidad de rhEPO por péptidos de bibliotecas combinatorias
Autor/es:
MARTÍNEZ CERON MARÍA C.; TAULÉS MARTA; MARANI MARIELA M.; ETCHEVERRYGARAY MARINA; ALBERICIO FERNANDO; CASCONE OSVALDO; CAMPERI SILVIA A.
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires, ARGENTINA
Reunión:
Jornada; Herramientas modernas para el estudio de aspectos estructurales de proteínas; 2009
Institución organizadora:
Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica
Resumen:
&amp;amp;lt;!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-MX; mso-fareast-language:ES-MX;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --&amp;amp;gt; <!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Tahoma; panose-1:2 11 6 4 3 5 4 4 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1627421319 -2147483648 8 0 66047 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-MX; mso-fareast-language:ES-MX;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Con el objeto de desarrollar una matriz cromatográfica de afinidad para purificar la eritropoyetina recombinante humana (rhEPO) en un solo paso, se identificaron ligandos para la misma por el screening de bibliotecas combinatorias peptídicas del tipo “una bolilla un péptido”. Para la evaluación de la afinidad por rhEPO de los péptidos seleccionados se utilizó un biosensoar de resonancia plasmática de superficie Biacore T100, herramienta sofisticada para medir la interacción entre moléculas. Se sintetizó una biblioteca combinatoria de octapéptidos por el método de dividir-acoplar-recombinar, que permite obtener una única entidad peptídica por bolilla de resina. Para el screening se puso en contacto la biblioteca con rhEPO conjugada con el colorante fluorescente Texas Red. Se aislaron las bolillas fluorescentes y los péptidos de las bolillas seleccionadas se secuenciaron por tandem MALDI-TOF MS. Para analizar la afinidad de los péptidos resultantes del screening se marcó la rhEPO con biotina y se la inmovilizó con un chip de streptavidina. Para abaratar el análisis teniendo en cuenta los costos de los chips, se inmovilizó la rhEPO en ligar de cada péptido. Se hallaron péptidos con afinidad por rhEPO en el rango de Kd de 10-5 - 10-6 M, que serán luego sintetizados en mayor escala para ser inmovilizados y evaluarlos como candidatos para purificación de rhEPO por cromatografía de afinidad.