INVESTIGADORES
MARANI mariela Mirta
congresos y reuniones científicas
Título:
Heparina y antitrombina III-sepharosa
Autor/es:
MARANI MARIELA M.; LEOCATA NIETO FRANCISCO
Lugar:
Rosario, Santa Fe, ARGENTINA
Reunión:
Congreso; II Congreso Nacional de estudiantes de Farmacia; 2000
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Rosario
Resumen:
INTRODUCCIÓN: Para estudiar el grado de afinidad por la Antitrombina III (AT-III), de diferentes fracciones de heparina, las muestras se analizaron por cromatografía de afinidad con AT III-Sepharosa. En ensayos preliminares se sembraron 2 mg de heparina total, se lavó la resina con buffer de siembra y se eluyó la heparina con un gradiente lineal de CINa. Para calcular el rendimiento obtenido en las corridas, se midió el contenido en heparina de las distintas fracciones recogidas (percolado, lavado de la resina con buffer de siembra y gradiente de elución con CINa). Cuando se analizó la distribución del gliosaminoglicano (GAG) entre las distintas fracciones recogidas se comprobó que solo en las dos primeras fracciones (percolado y lavado) se recuperaba una cantidad de heparina 20 veces mayor que la que se había sembrado (20 mg). OBJETIVOS: Conocer el origen del exceso de GAG detectado. Aislar e identificar el compuesto químico responsable del color desarrollado. Purificar la resina para su posterior utilización. MATERIALES y MÉTODOS: Para conocer el origen del GAG extra, se recogió el medio de suspensión de la resina (percolado inicial) y se agregó un paso de lavado de la columna con buffer de siembra (lavado inicial), antes del agregado de heparina. Se recogieron fracciones de 1 ml, y en cada una de ellas y se midió el contenido en heparina por el método del Indol- CIH (Rodriguez Montelongo y col, 1986). Para conocer la naturaleza química de este compuesto, se realizaron las curvas de hidrólisis en medio ácido descriptas en el mismo trabajo, que permiten diferenciar la heparina de otros GAGs relacionados (dermatan sulfato, condoitrín sulfatos A y B y ácido hialurónico) RESULTADOS y CONCLUSIONES: En muestras comerciales de AT III- Sepharosa se ha detectado la presencia de un material que reacciona con el Indol en presencia de CIH, en las condiciones en que lo hace la heparina y otros GAGs. Este material eluye en el percolado y en las primeras fracciones del lavado inicial. Esto significa que se trata de un material que fue incorporado con la resina, porque en estas etapas aún no se ha agregado la heparina que se desea estudiar. Se ha comprobado que es suficiente lavar la resina con el buffer de siembra para eliminar completamente este compuesto químico. Este material se ha aislado, se ha cuantificado, y se ha identificado por las características del espectro de absorción del producto coloreado formado, y por su comportamiento en diferentes condiciones de hidrólisis.