INVESTIGADORES
MARINO Veronica Julieta
congresos y reuniones científicas
Título:
El factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) inhibe el crecimiento in vivo de un tumor mamario murino
Autor/es:
JULIETA MARINO; ELSA ZOTTA; VERÓNICA FURMENTO; LEONOR ROGUIN
Lugar:
Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires.
Reunión:
Simposio; Avances en Inmunología Básica y Aplicada. De la mesada a la clínica; 2008
Institución organizadora:
Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica
Resumen:
Introducción El factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) es una citoquina que estimula la proliferación y diferenciación de células del linaje granulocítico, desde precursores mieloides a neutrófilos maduros. Esta proteína es comúnmente utilizada en la clínica para aumentar la producción de neutrófilos en pacientes con neutropenia inducida por quimioterapia. Trabajos previos informaron la remisión de un hepatocarcinoma avanzado en un paciente tratado con G-CSF (1) y la efectividad del tratamiento con G-CSF en diferentes tipos de leucemias (2). Asimismo, se ha demostrado que la expresión y liberación de G-CSF en células de tumor transfectadas con el gen para esta citoquina inhibe el crecimiento tumoral in vivo (3). A pesar de estos resultados, diversos estudios han mostrado que la administración de G-CSF favorece el crecimiento tumoral y la angiogénesis (4).  El propósito del presente trabajo fue evaluar la acción in vivo de la administración de G-CSF en un modelo tumoral murino. Resultados Se inocularon ratones BALB/c (20-25g),  por vía subcutánea, con 3x105 células LM3 derivadas de un adenocarcinoma mamario de ratón. A partir del día 7, los ratones fueron divididos en tres grupos (n= 7): el grupo I (control) recibió 0.2 ml de PBS; los grupos II y III recibieron 10 y 100 µg/kg de G-CSF en las proximidades del tumor. Las inoculaciones se realizaron por vía subcutánea diariamente durante 3 semanas. El tamaño de los tumores y el número de leucocitos en sangre se evaluaron a lo largo del tratamiento. Al finalizar el mismo, los tumores fueron medidos y analizados histológicamente. El tamaño de los tumores se midió con un calibre y el volumen tumoral se calculó usando la fórmula V= (D x d2)/2, donde D es el diámetro mayor y d el menor.  Los resultados mostraron que la administración de 100 µg/kg de G-CSF redujo en un 70 % (p< 0.01) el volumen tumoral, aunque no hubo reducción significativa con dosis de 10 µg/kg. Si bien los tumores, en concordancia con resultados previamente informados (5), indujeron una inversión de la relación granulocitos/linfocitos, los valores sanguíneos de leucocitos totales no se modificaron. El examen histológico de cortes tumorales reveló la presencia de un infiltrado inflamatorio polimorfonuclear en el frente de crecimiento de tumores tratados con G-CSF. Por ensayos de TUNEL se identificaron células apoptóticas tumorales. El análisis por Western blot de los lisados provenientes de tumores reveló un incremento en los niveles de expresión de la proteína pro-apoptótica Bax; entre las proteínas anti-apoptóticas, disminuyeron los niveles de Bcl-2 y no se modificaron los de Bcl-XL. Asimismo, se observaron incrementos significativos en la expresión de ligandos inductores de apoptosis, tales como FasL y TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand). También se evaluó el perfil de secreción de 22 citoquinas en los lisados de células tumorales por Cytokine Array. Los resultados obtenidos mostraron un aumento significativo en los niveles de IL-12, IL-13 y TNF-a en muestras provenientes de animales tratados. Por otro lado, ensayos in vitro revelaron que aunque las células LM3 expresan receptores para G-CSF, el agregado de citoquina no modificó el crecimiento celular. Conclusiones La administración de G-CSF inhibió el crecimiento tumoral in vivo, aunque no afectó la proliferación in vitro de células LM3. Estos resultados, junto con la presencia de un infiltrado inflamatorio y el incremento en los niveles de expresión de algunas citoquinas, sugieren la inducción de una respuesta inmune antitumoral. Esta respuesta sería responsable de la activación de señales apoptóticas que conducen a la eliminación de células tumorales. Experimentos adicionales ayudarán a dilucidar el rol del infiltrado leucocitario y del perfil de citoquinas en la acción citotóxica inducida por el G-CSF. Bibliografía 1. Bru A, Albertos S, Garcia-Hoz F, Bru I. J Clin Res 2005; 8:9-13. 2. Picalluga PP, Martinelliu G, Malagola M, Rondoni M, Bianchini M, Basan G, Baccarani M. Haematologica 2003; 88: ECR28. 3. Colombo MP, Lombardi L, Stoppacciaro A, Melani C, Parenza M, Bottazzi B, Parmiani G. J Immunol 1992; 149(1):113-119. 4. Okazaki T, Ebihara S, Asada M, Kanda A, Sasaki H, Yamaya M. Int Immunol 2006; 18(1):1-9. 5. Diament MJ, Stllitani MI, Puricelli L, Bal de Kier-Joffe E, Klein S. Oncol Rep 2003; 10(5):1647-1652.