Efecto apoptótico inducido luego de la irradiación de una ftalocianina de Zn (II) lipofílica en células de carcinoma de colon

NICOLÁS A. CHIARANTE; JULIETA MARINO; GARCÍA VIOR M. CECILIA; JOSEFINA AWRUCH; LEONOR P. ROGUIN

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Sociedad Argentina de Inmunología

EFECTO APOPTÓTICO INDUCIDO LUEGO DE LA IRRADIACIÓN DE UNA FTALOCIANINA DE ZN (II) LIPOFÍLICA EN CÉLULAS DE CARCINOMA DE COLONChiarante, Nicolás Agustín1; Marino, Julieta1; García Vior, María C.2; Awruch, Josefina2; Roguin, Leonor1Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (IQUIFIB)-CONICET, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires1; Depto. de Química Orgánica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires2Las ftalocianinas (Pc) son compuestos fotosensibilizadores de potencial utilidad como agentes antitumorales en terapia fotodinámica. En nuestro laboratorio evaluamos la potencia antiproliferativa de una Pc lipofílica (Pc9) incorporada en micelas de poloxamina sobre la línea celular CT26 (carcinoma de colon murino) (IC50 10 ± 1 nM). Con el fin de esclarecer el mecanismo de acción de Pc9 estudiamos, en primer lugar, la internalización del compuesto en las células CT26. Demostramos, mediante ensayos de citometría de flujo, una captación máxima luego de 4h de incubación. Por microscopía confocal, observamos que el compuesto se localiza principalmente en lisosomas. Luego de incubar las células con Pc9, detectamos un incremento de aproximadamente 4 veces en la población de células hipodiploides a tiempo 0 post-irradiación (10,04 ± 0,01% células tratadas vs 2,255 ± 0,001% control). Asimismo, por ensayos de Western blot comprobamos una reducción del 66% y 78% en los niveles de expresión de las proteínas Bid y Bcl-XL, respectivamente (p< 0,005). Por otro lado, la disminución observada en los niveles de procaspasa 3 (66%, p< 0,01) sugirió la activación de la caspasa efectora de la apoptosis. Para evaluar un posible daño de la membrana mitocondrial utilizamos la sonda fluorescente DiOC6. Por citometría de flujo evidenciamos un aumento en la proporción de células con la membrana mitocondrial despolarizada (58,4 ± 0,4% células tratadas vs 1,1 ± 0,4% control). En conclusión, demostramos que Pc9 se incorpora en vesículas lisosomales de células CT26 y luego de la irradiación desencadena una respuesta apoptótica caracterizada por el clivaje de Bid, la disminución de la proteína anti-apoptótica Bcl-XL, la despolarización de la membrana mitocondrial, la activación de la caspasa 3 y daño a nivel nuclear. Sobre la base de estos resultados, nos proponemos evaluar en un futuro la potencia fotobiológica de Pc9 en ensayos in vivo.