INVESTIGADORES
MARINO Veronica Julieta
congresos y reuniones científicas
Título:
La permeabilización de la membrana lisosomal es un evento temprano en el efecto fototóxico de una ftalocianina de Zn(II) catiónica
Autor/es:
MARINO JULIETA; GARCÍA VIOR M. CECILIA; FURMENTO VERÓNICA A.; AWRUCH JOSEFINA; ROGUIN LEONOR
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2011 y II Congreso Nacional y IV Reunión Científica Regional por el bienestar del animal de laboratorio; 2001
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Fisiología y Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio
Resumen:
Previamente demostramos que la
ftalocianina de Zn(II) catiónica Pc13 es un fotosensibilizador que se localiza
preferencialmente en lisosomas e induce la producción de especies reactivas del
oxígeno (ROS) que llevan a la muerte de células tumorales.
En el presente trabajo evaluamos
los mecanismos involucrados en la acción fototóxica de Pc13. En primer lugar,
observamos que luego de irradiar las células KB (carcinoma orofaríngeo) se
produce una permeabilización temprana de la membrana lisosomal y un incremento
de 3.0 ± 0.1 veces (p<0.001) en la liberación de catepsina D al citosol
(tiempo 0 post-irradiación, p.i.). Después de 1 h detectamos una disminución
del potencial de membrana mitocondrial, y a las 3 h p.i. evidenciamos la
liberación de citocromo-c al citosol (1.82 ± 0.02 veces, p<0.0003) y un
aumento en la actividad de caspasa-3 (3.2 ± 0.3 veces, p<0.001). Estos
hallazgos indican la activación de una vía apoptótica mitocondrial. También
demostramos que tanto la permeabilización lisosomal como mitocondrial fueron
revertidas mediante el empleo de antioxidantes (Trolox 5 mM y ácido ascórbico 10 mM). Asimismo, la
incubación de las células con un inhibidor de catepsina D (pepstatina A 40 µM)
produjo una disminución del 48 ± 4% del efecto fototóxico de Pc13, sugiriendo
que las proteasas lisosomales están involucradas en este proceso. Cuando
evaluamos la participación de la vía extrínseca, no observamos cambios
significativos en los niveles de expresión de los receptores de muerte Fas y
DR5 y de sus respectivos ligados FasL y TRAIL.
En conclusión, nuestros
resultados permiten proponer la secuencia temporal de eventos responsables del
efecto fototóxico de la Pc13.
En este sentido, demostramos que la producción de ROS produce la pérdida
temprana de la permeabilidad lisosomal, la liberación de proteasas al citosol,
la posterior disminución del potencial de membrana mitocondrial y la activación
de la caspasa efectora-3.