Caracterización de epitopes crípticos y conformacionales del factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF)

VERÓNICA J. MARINO; AÍDA STERIN-PRYNC; ALEJANDRO VIDAL; LILIA A. RETEGUI; LEONOR ROGUIN

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XLVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología.; 1998

Sociedad Argentina de Inmunología

El G-CSF es un factor de crecimiento hematopoyético que estimula la proliferación y diferenciación de células precursoras y maduras. Con el propósito de caracterizar su interacción con receptores, se utilizaron dos anticuerpos monoclonales (MAb) anti-G-CSF denominados 295 y 136. Los dos MAb reconocieron al G-CSF insolubilizado en placas de polivinilo. Sin embargo, sólo el MAb 295 reconoció a la proteína en solución e inhibió la unión del 125I- G-CSF a receptores de membranas de placenta humana. Para identificar la estructura del epitope delimitado por los MAb se realizaron digestiones proteolíticas del G-CSF con diferentes endoproteinasas. Los fragmentos peptídicos obtenidos fueron separados por SDS-PAGE, transferidos a membranas de PVDF e incubados con los MAb. La secuencia de aminoácidos de algunos de estos fragmentos se determinó por degradación de Edman. Los resultados indicaron que el MAb 295 reconoció un epitope conformacional probablemente involucrado en el dominio de unión a receptores y  localizado en la secuencia 1-122 del G-CSF. Por otro lado, el MAb 136 reconocería un epitope críptico comprendido entre los aminoácidos 23-93 o 23-98 de la citoquina.