Estudio de la interacción del factor estimulante de colonias de granulocitos con sus receptores mediante el uso de anticuerpos monoclonales

VERÓNICA J. MARINO; AÍDA STERIN-PRYNC; LEONOR ROGUIN

Viña del Mar, Chile

Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología molecular y Biología Celular; 2000

Sociedad Argentina de Inmunología

El factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) es una glicoproteina de 174 aminoácidos que estimula la proliferación, diferenciación y activación de precursores de neutrófilos. Con el fin de estudiar la interacción de este factor de crecimiento con sus receptores, se emplearon anticuerpos monoclonales (mAbs) anti hG-CSF, denominados 6E3 y 8C2. Ambos reaccionaron con el hG-CSF nativo, pero solo el mAb 8C2 detectó a la proteina reducida y bloqueada en esayos de ELISA de competición, sugiriendo que el mAb 8C2 reconoce un epitope lineal, mientras que el mAb 6E3 estaría dirigido contra un dominio conformacional. Cuando se estudió el efecto de los mAbs sobre células de una línea celular de leucemia mieloide (NFS-60), se demostró que el mAb 6E3 inhibió el crecimiento inducido por el hG-CSF, mientras que el mAb 8C2 no produjo ningún efecto. Además solo este útimo pudo unirse a complejos preformados con hG-CSF y receptores presentes en membranas de las células. Para identificar la región de la citoquina definida por los mAbs, se realizaron digestiones proteolíticas del hG-CSF con las endoproteinasas Arg-C, Glu-C, quimotripsina y tripsina. Se estudió la inmunorreactividad de algunos de los péptidos obtenidos por Western Blot y se detreminó la secuencia de aminoácidos por degradación de Edman. Los resultados indicaron que el mAb 6E3 reconoció un epitope conformacional, localizado la región 1-122/123, probablemente inolucrado en el dominio de unión del hG-CSF a sus receptores; mientras que el mAb 8C2 estaría dirigido contra un epitope lineal, comprendido entre los aminoácidos 41-58 de la citoquina que quedaría expuesto en complejos hG-CSF:receptor