Identificación de receptores y de señales intracelulares activadas por el factor estimulante de colonias de granulocitos en células trofoblásticas

MARINO V J; STERIN-PRYNC A; ROGUIN L

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; 50º Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) es una citoquina, que actúa en la médula ósea promoviendo la proliferación y diferenciación de precursores mieloides a neutrófilos. A su vez, el G-CSF favorece la sobrevida y la liberación de células maduras al torrente sanguíneo, así como también la activación de las funciones celulares relacionadas con la destrucción de patógenos. Los efectos de la citoquina se desencadenan luego de la unión del ligando con moléculas receptoras presentes en la superficie de células blanco.Aunque se ha descripto la presencia del receptor para G-CSF en células no hematopoyéticas, la activación de señales intracelulares y su respuesta biológica no han sido todavía determinadas. Previamente estudiamos la interacción del G-CSF con receptores presentes en microsomas de placenta humana y observamos que la orientación de la molécula de citoquina era similar a la obtenida luego de unirse a receptores hematopoyéticos. En el presente trabajo, con el propósito de identificar posibles mecanismos de transducción de señales del G-CSF en el tejido placentario, utilizamos una línea de células trofoblásticas derivadas de un coriocarcinoma humano (JEG-3). En primer lugar, determinamos la presencia del receptor para G-CSF en estas células y se estimaron los parámetros de la interacción, siendo la constante de afinidad (Ka) y la capacidad de unión 3x109 M-1 y 1,5x10-12 M (1290 sitios/célula), respectivamente. Estos valores no difirieron significativamente de los parámetros obtenidos en células mieloides (Ka=1x109 M-1 y capacidad de unión=3x10-11 M, 1350 sitios/célula).Para determinar si la unión de la citoquina en las células trofoblásticas inducía la activación de proteínas intracelulares, se realizaron ensayos de estimulación con G-CSF y posterior inmunoprecipitación con anticuerpos dirigidos contra diferentes quinasas y factores de transcripción. Los resultados obtenidos demostraron que el G-CSF indujo la fosforilación de la quinasas JAK2 Tyk2 y del factor de transcipción STAT3, y no de las proteínas JAK1, STAT1 y STAT5, tanto en las células mieloides NFS-60 como en las células trofoblásticas. Sin embargo, cuando se estudió la participación de la vía de las protein-quinasas activadas por mitógenos, MAPK) se observó la fosforilación de la quinasa MAPK p38 sólo en las células mieloides. En resumen, este trabajo permitió la identificación de receptores para el G-CSF en células trofoblásticas y constituye la primera evidencia de activación de mecanismos de transducción en respuesta al G-CSF en estas células.