Uso combinado de métodos convencionales y moleculares para la identificación de Monilinia fructicola y Monilinia laxa del Alto Valle de Río Negro y Neuquén

SOSA C.; LOPES C. A.; DOBRA A.; LUTZ C.; SANGORRÍN M.

Córdoba

Congreso; I Congreso Argentino de Fitopatología; 2008

En la región, M. fructicola no es un patógeno importante, pero dificulta las exportacionesde fruta de carozo a Europa (cuarentenaria). Por las similitudes morfológicas entre lasespecies de Monilinia, resultan necesarias herramientas de identificación precisas quegaranticen la sanidad en las exportaciones. En este trabajo, se identificaron lasespecies por métodos morfológicos convencionales y moleculares (secuenciación). Serecuperaron 8 aislamientos a partir de ciruelo y nectarinas de Cinco Saltos y Gral. Roca.De acuerdo a caracteres morfológicos y culturales, se identificaron los aislamientosmo1: M. laxa y mo2-8: M. fructicola. De cada aislamiento se extrajo el ADN total y seamplificó por PCR la región 5,8S-ITS del ADNr. En todos los casos se obtuvo unfragmento amplificado de 550 pb., el cual se purificó y secuenció, observando unadiferencia en 3 posiciones nucleotídicas entre ambas especies. Cada una mostró 100%de homología con secuencias de las respectivas especies presentes en Genbank,aisladas de diferentes lugares del mundo. La secuenciación de 5,8S-ITS confirmó laidentidad de los aislamientos obtenida por métodos convencionales. Se estudiaron losaislamientos de M. fructicola a nivel de cepa por el método RAPD-PCR con 6cebadores, de los cuales 3 amplificaron con éxito y fueron reproducibles (OPA1, OPA11y R3). El cebador R3 permitió obtener perfiles con adecuado número de bandas parausarse en la caracterización intraespecífica de M. fructicola.