Modulación de la actividad enzimática de la acetilcolinestarasa eritrocitaria bovina (AEB) en membranas naturales transferidas a filmes de Langmuir-Blodgett (LB)

FELSZTYNA, IVÁN; PERILLO, MARÍA ANGÉLICA; CLOP, EDUARDO M

Santiago del Estero

Congreso; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2015

Sociedad Argentina de Biofísica (SAB)

La AEB es una enzima asociada a la membrana plasmática de eritrocitos por medio de un anclaje hidrofóbico de tipo GPI. Este contacto permitiría la transmisión de información entre la proteína y la interfase, afectando su actividad catalítica. En consecuencia, los filmes LB podrían ser utilizados para evaluar los efectos del empaquetamiento molecular de la membrana en la actividad de la AEB. En el presente trabajo, se prepararon filmes de Langmuir a partir de suspensiones de vesícula de membranas eritrocitarias bovinas purificadas (MEB) y se estudiaron sus propiedades interfasiales. Las isotermas de presión superficial (π)-área mostraron una transición bidimensional πt = 15,5 ± 1,4 mN/m correspondiente con módulo de compresibilidad Kt = 66,04 ± 2,52 La presión de colapso fue πc = 45,4 ± 1,2 mN/m, con un Kc = 36,6 ± 0,7 mN/m. Estos valores de Kt y Kc indican un comportamiento de tipo líquido expandido a lo largo de toda la isoterma. Estas monocapas se transfirieron a soportes hidrofóbicos planos (LBMEB) a dos π, 10 mN/m (LB10) y 35 mN/m (LB35), y fueron utilizados como fuente de enzima para estudiar la cinética de hidrólisis del sustrato artificial acetiltiocolina a 37ºC que da como productos tiocolina más acetato. A diferencia de lo observado para otras proteínas incorporadas a membranas, donde el aumento en la π indujo un cambio hacia una cinética sigmoidea, en este caso se obtuvo una cinética de tipo michaeliana para todos los tratamientos. En la membrana en suspensión, los parámetros cinéticos fueron Vmax = 3,41 ± 0,15 nmoles P/min·µg prot. y KM = 0,11 ± 0,02 mM. En los filmes LB10, se obtuvo una Vmax = 0,021 ± 0,002 nmoles P/min·µg prot y una KM = 0,037 ± 0,017 mM, mientras que en los filmes LB35, los parámetros fueron Vmax = 0,047 ± 0,003 nmoles P/min·µg prot. y KM = 0,079 ± 0,023 mM. Un posible desplegamiento de AEB, al exponerse a la interfase aire-agua, modificaría su estructura 3D hacia una conformación de mayor afinidad para la formación del complejo enzima-sustrato. La disminución de Vmax en los filmes LB respecto a la observado en vesículas, podría deberse a una transferencia selectiva de proteínas desde el film de Langmuir al soporte sólido. La recuperación de la AEB mejoraría con un mayor empaquetamiento molecular a mayor π de transferencia, reflejado por el aumento significativo en la Vmax si se comparan los LB10 con los LB35.