MODIFICACIONES PUNTUALES EN EL ECTODOMINIO DE LA PROTEÍNA M2 DE INFLUENZA PARA LA EVALUACIÓN DE VACUNAS UNIVERSALES

GOMEZ JM; SPERAT W; MATTION N; IBAÑEZ LI

Ciudad de Buenos Aires

Jornada; Jornadas de Jóvenes investigadores; 2018

Facultad de veterinaria UBA

El virus de influenza causa infecciones epidémicas en el hombre, las aves y diversasespecies de animales susceptibles. El virus evoluciona continuamente mediante intercambiode segmentos genómicos o por incorporación de mutaciones en las proteínas de superficiecontra las cuales se dirige la respuesta inmune evocada por las vacunas convencionales. Porlo tanto las vacunas deben ser actualizadas anualmente. Una estrategia para superar estadificultad consiste en dirigir la respuesta inmune hacia regiones más conservadas del virustales como el ectodominio de la proteína M2 (M2e), con el fin de generar vacunasuniversales. Sin embargo, y a pesar de que M2e está conservada, con baja frecuencia se hanreportado algunas mutaciones que podría poner en riesgo la efectividad de dichas vacunas.El objetivo del proyecto es generar virus de influenza A con M2e modificados con el fin dedeterminar el fitness y el potencial de escape de dichos virus a la respuesta inmune inducidapor vacunas universales. Como paso inicial se comenzó con la introducción de mutacionespuntuales en M2e utilizando un vector para genética reversa que codifica la proteína M2 enel mismo fragmento que la proteína NA. Se utilizó también un segundo vector que expresala proteína M1 y tienen deleteados los sitios de splicing alternativo que conducen a laexpresión de M2. Utilizando la técnica de mutagénesis dirigida se introdujeron mutacionesen M2e por PCR seguida por restricción con la enzima DpnI y posterior transformación enbacterias DH5alfa. Los clones positivos se analizaron por restricción con la enzima XbaI.Para poner a punto la técnica de genética reversa, que permite la generación de virusinfectivo, se co-transfectaron células HEK-293 con estos vectores y otros 6 vectores quecodifican para el resto de las proteínas del virus. A las 24-48 horas postransfección, seutilizó el sobrenadante de las células transfectadas para infectar células MDCK y sedeterminó la formación de partículas infectivas por observación de la destrucción de lamonocapa de células. Las construcciones también fueron analizadas mediante Western Blotpara determinar la correcta expresión de las proteínas M1 y M2. A partir de los resultadosobtenidos hasta el momento, podemos concluir que es posible la modificación del virus deinfluenza mediante las estrategias planteadas. Esto nos permitirá generar virus mutantespara determinar la capacidad protectiva de vacunas universales basadas en M2e.