INVESTIGADORES
IBAÑEZ Lorena Itati
congresos y reuniones científicas
Título:
INGENIERÍA DE NANOANTICUERPOS PARA LA DETECCIÓN DE LA PROTEÍNA HA DE INFLUENZA
Autor/es:
PAVAN MF; GOMEZ JM; PAREDES ROJAS Y; MATTION N; IBAÑEZ LI
Lugar:
Ciudad de Buenos Aires
Reunión:
Jornada; Jornadas de Jóvenes investigadores; 2018
Institución organizadora:
Facultad de veterinaria UBA
Resumen:
La región variable de los anticuerpos de cadena pesada de camélidos, conocidos comoNanoanticuerpos (NAcs), tienen un gran potencial para diversas aplicaciones eninvestigación, diagnóstico y como moléculas terapéuticas. Estos fragmentos de anticuerposposeen características como pequeño tamaño, gran estabilidad, alta solubilidad yespecificidad, además se pueden producir a un menor costo que los anticuerposmonoclonales. En nuestro laboratorio hemos generado NAcs con capacidad dereconocimiento de la proteína HA de diferentes serotipos del virus de influenza A. En estetrabajo proponemos realizar diferentes construcciones que permitan mejorar y ampliar eluso de estos anticuerpos tanto para el estudio como para la inhibición de la infeccióncausada por el virus de Influenza A. Los objetivos propuestos fueron I)-mejorar la afinidadde los NAcs producidos mediante aumento de la valencia, generando NAcs bivalentes. II)-acoplar los NAcs a proteínas fluorescentes para permitir su uso en microscopía defluorescencia (chromobodies). III)-Agregar la región Fc de anticuerpos convencionales conel fin de mejorar el efecto antiviral por activación de la inmunidad celular. Para construirNAcs bivalentes se generó un vector que contiene las secuencias de dos NAcs flanqueadospor sitios de restricción únicos que permiten intercambiar fácilmente las secuenciasclonadas. Se generaron secuencias de NAcs mono- y bi-específicos utilizando lassecuencias de los NAcs 2 y 4 previamente seleccionados para reconocer a la proteína HAde influenza. Dichas secuencias fueron separadas por linkers de Glicinas-Serinas quecodifican 5 o 10 aminoácidos. Las mismas secuencias de NAcs fueron utilizadas paraacoplar a las proteínas GFP y mCherry utilizando un vector para expresión en célulaseucariotas que contiene además una secuencia de secreción para su purificación desdesobrenadante de células transfectadas que será utilizado para detectar la proteína HA encélulas MDCK infectadas con diferentes virus de Influenza utilizando microscopíaconfocal. Para la construcción de los vectores que permiten expresar los NAcs acoplados alas regiones Fc se utilizaron las secuencias de las inmunoglobulinas de ratón de los isotiposIgG1, IgG2a e IgG2b. Se obtuvieron clones positivos que podrán ser expresados en célulasHEK-293 y purificados utilizando columnas de afinidad, de modo que permitanposteriormente su aplicación en experimentos in vitro e in vivo. En este trabajodemostramos que es posible modificar NAcs mediante la generación de construcciones enforma de casetes que permiten clonar cualquier secuencia de NAcs y ampliar, de este modo,su rango de aplicación.