Capacidad neutralizante contra la cepa H1N1 PR8m de nanoanticuerpos HA0 específicos.

SOSA HOLT C; BAZTARRICA J; BARBIERI E; GARAICOECHEA E; ASENZO G; IBAÑEZ LI; BAUMEISTER E; WIGDOROVITZ A; PARREÑO V; PUNTEL M

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

El virus Influenza tipo A posee genomaARN de 8 segmentos y pertenece a la familia Orthomyxoviridae. Los fenómenos decambios genéticos y reasociación de los genomas segmentados generan lanecesidad de complementar la formulación de las vacunas con terapiasneutralizantes. Los nano-anticuerpos (VHHs) son moléculas derivadas deanticuerpos presentes en llamas monoclonales y debajo peso molecular (15kDa),alta afinidad, especificidad, estabilidad y solubilidad, por lo que sepresentan como herramientas atractivas para su administración en tratamientosde inmunidad pasiva. Previamente hemos descripto clones de VHHs seleccionadosespecíficos contra la proteína recombinante HA0 de la cepa viral H1N1 A/Puerto Rico/8/1934(PR8) y también reconocen específicamente un aislamiento argentino de la cepapandémica (H1N1 A/Argentina/017/ 2009) (H1N1Pdm). En el presente trabajo presentamos lacapacidad neutralizante observada in vivo de los clones G41.2 y E13.2 frente aldesafío viral en el modelo ratón. Se utilizó la cepa de referencia de tipo Amurinizada (A/H1N1 Puerto Rico/8/1934, PR8m), dosis 2DL50/50ul administrada porvía intranasal (in). Se introdujeron dos grupos control: CNeg de animalestratados con PBS e infectados con virus PR8m, y CPos de animales tratados conun suero policlonal de ratón inmunizado con H1N1Pdm. El ensayo deneutralización profiláctica se realizó mediante la administración in de VHHs,4hs antes de la infección viral: G41.2 100ug y G41.2 200ug; y E13.2 100ug,E13.2 50ug y E13.2 25ug (en 50ul de PBS-1% BSA) (n=5). Se realizó elseguimiento de peso de los animales desafiados durante 14 días; tanto como elanálisis de título viral infeccioso en homogenato de tejido pulmonar, 4 díaspost- infección (dpi). Los resultados observados indican unareducción en el título infeccioso en los animales tratados con VHHs respecto delos controles de PBS que se condice con la disminución de peso observada:grupos E13.2 100ug y E13.2 50ug con títulos virales menores a 1UHA/ml; grupos tratadoscon suero hiperinmune de ratón, G41.2 100ug y G41.2 200ug mostraron títulosvirales mayores a 3UHA/ml; y el grupo CNeg mostro títulos mayores a 6UHA/ml.Los resultados presentados reforzarían la caracterización bioquímica yfuncional de los clones E13.2 y G41.2 anteriormente presentada en cuanto alepitope blanco de interacción. Por un lado, E13.2 mostro capacidadneutralizante frente a H1N1 PR8m aun utilizando 50ug de VHH, además deneutralizar a H1N1Pdm lo que se trataría de un anticuerpo neutralizantedirigido al tallo de la proteína HA0. Por otro lado, G41.2 no logro neutralizara PR8m mientras que si a H1N1Pdm, y logra inhibir la hemaglutinación; por loque estaría interactuando con la cabeza de la HA0. Pese a haber sidoinicialmente seleccionado con HA0 de PR8 recombinante el epitope especifico se habríaperdido en el proceso de murinización de la cepa. Esto último será confirmadopor comparación de secuencias entre HA0 recombinante y HA0 de PR8.