LA EXPOSICIÓN DE UN DOMINIO CONSERVADO DE LA HEMAGLUTININA DEL VIRUS DE INFLUENZA POR MEDIO DE UNA VACUNA GENÉTICA GENERA UNA RESPUESTA HUMORAL DE MAYOR ESPECTRO QUE LA CORRESPONDIENTE SUBUNIDAD PROTEICA

CALDEVILLA CECILIA; PAREDES ROJAS YESICA; OUSSET JULIA; IBAÑEZ LORENA ITATÍ; MATTION NORA

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII congreso Latinoamericano de Microbioloía; 2016

Las vacunas convencionales contra influenza estimulan una fuerte respuesta inmune humoral frente a hemaglutinina (HA), una de las proteínas externas del virus. Los anticuerpos inducidos son específicos para cada cepa yaque en general reconocen el dominio globular altamente variable, por lo que los virus que mutan escapan fácilmente a la neutralización. Se ha reportado la existencia de epitopes en la región deltallo de HA, que están altamente conservadas y pueden ser muy relevantes en la protección si son expuestos eficientemente al sistema inmune del huésped. El objetivo de este trabajo es estudiar distintas estrategias de exposición del dominio conservado de la HA de la cepa A/Equi/Argentina/93 (H3N8), conel fin de generar inmunógenos capaces de ampliar el espectro de reactividad delos anticuerpos generados en comparación con la vacuna convencional contra la Influenza equina.Paraello se generaron dos inmunógenos basados en una secuencia de la región conservada de la HA, en los cuales de eliminó el dominio globular inmunodominante. El primero es una proteína recombinante expresada en unsistema procariota, mientras que el segundo es una vacuna a ADN que contiene lamisma secuencia de nucleótidos, más un dominio de trimerización. La inmunogenicidad de ambos fue evaluada mediante diferentes protocolos de inmunización. Para la vacuna a subunidad proteica, la secuencia fue clonada en el vector pET22b, expresada en E.coli y la proteína recombinante fue purificada a partir de cuerpos de inclusión. En el caso dela vacuna ADN la secuencia fue clonada en el vector para vacunas pCAGGS. En ambos casos la expresión de las proteínas fue confirmada mediante Western blot. Ratones BALB/c fueron inmunizados con ambas vacunas en forma individual o combinada secuencialmente y los sueros fueron evaluados por ELISA,utilizando proteína recombinante (subtipo H3) o partículas virales de una cepa homóloga (subtipo H3) o heteróloga (subtipo H1).Como era esperable, en placas sensibilizadas con proteína recombinante, los títulos de anticuerpos más altos correspondieron a los animales inmunizados con proteína, seguidos por aquellos inmunizados con combinacionesde proteína y ADN. Los animales inmunizados sólo con ADN mostraron los títulosmás bajos. Cuandolos sueros se analizaron en placas cubiertas con partículas virales completas,se observó también mejor respuesta a la inmunización con proteína cuando el virus pertenecía al mismo subtipo (H3). Sin embargo, la respuesta frente avirus pertenecientes a otro grupo filogenético (subtipo H1) fue más alta en elcaso de los animales inmunizados con ADN. Estos resultados sugieren que una vacuna basada en la región conservada de HA provee protección frente a otras cepas virales del mismo subtipo H3, y eventualmente frente a cepas pertenecientes a otros subtipos virales. Además, que la forma de vehiculización del antígeno podría ser importante para ampliar el espectro de protección inducida por las vacunas.