EVALUACIÓN DE LA INMUNOGENICIDAD DE ANTÍGENOS RECOMBINANTES DERIVADOS DE LA HEMAGLUTININA DEL VIRUS DE INFLUENZA EQUINA PARA USO COMO VACUNAS UNIVERSALES

CALDEVILLA CECILIA; PAREDES ROJAS YESICA; IBAÑEZ LORENA ITATÍ; MATTION NORA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología - II Congreso Latinoamericano de Virología-V Simposio de Virología Clínica - II Simposio de Virología Veterinaria Dr. José L. La Torre; 2015

Las vacunas convencionales contra influenza equina estimulan una fuerte respuesta inmune humoral frente a glicoproteínas de superficie, en particular la hemaglutinina (HA). Sin embargo, el virus sufre continuos cambios aminoacídicos en los dominios reconocidos por los anticuerpos, que provocan que los virus escapen a la neutralización y que las vacunas no generen respuestas cruzadas contra diferentes cepas. Numerosos trabajos han reportado la existencia de epitopes altamente conservados en la región del tallo de la HA,que pueden ser utilizados para mejorar la respuesta inmune cruzada. Conel fin de generar vacunas que provean dicha protección, diseñamos dos inmunógenos basados dominios conservados de la HA de un virus equino aislado en Argentina. El primero es una proteína recombinante (deltaHAp), el segundo es una secuencia de nucleótidos clonada en vectores aptos para la generación devacunas a ADN (deltaHAe). La inmunogenicidad de ambos antígenos fue evaluada mediante diferentes protocolos de inmunización. La secuencia que codifica para ΔHAp fue clonada en el vector pET22b, se transformó en E.coli y la proteína recombinante fue purificada a partir de cuerpos de inclusión. La secuencia ΔHAefue clonada en varios vectores que fueron transfectados en células HEK 293T para su análisis. La correcta expresión delas proteínas fue determinada mediante Western blot. Se establecieron cinco esquemas de inmunización en ratones BALB/c y se realizaron 2 inmunizaciones conun intervalo de 15 días. El grupo 1 recibió dosis de 50 ug/ratón de ADN por vía IM. El grupo 2 recibió dosis de 10 ug de proteína recombinante en adyuvante incompleto de Freund por vía IP. Los animales del grupo 3 recibieron una dosis de ADN y un refuerzo con proteína recombinante. El grupo 4 recibió una inmunización inicial con proteína y luego un refuerzo con ADN. El grupo 5 se utilizó como grupo control no vacunado. Todos los sueros seevaluaron para determinar la presencia de anticuerpos anti-HA mediante ELISA ya sea en placas cubiertas por proteína o virus.Cuando se analizaron los títulos de anticuerpos en placas cubiertas con proteína recombinante, se observó que los animales que recibieron sólo ADN generaron bajos títulos y los vacunados con proteína mostraron los títulos más altos. En las inoculaciones combinadas de ambos antígenos, la respuesta inmune sólo mejoró cuando el refuerzo se realizó con proteína. Cuando los sueros se analizaron en placas cubiertas con virus, se observó mejor respuesta a la inmunización con proteína cuando el virus pertenecía al mismo grupo filogenético. Sin embargo la respuesta frente a virus pertenecientes a diferentes grupos filogenéticos fue mejor en el caso de inmunizar con ADN.Las proteínas se expresaron correctamente en sistemas procarióticos y eucarióticos. El esquema que mostró mayores títulos de anticuerpos fue el basado en proteína recombinante, en el caso de analizar respuesta homotípica, y en ADN en el caso de analizar respuesta heterotípica.