ESTABLECIMIENTO DE UN SISTEMA DE GENÉTICA REVERSA PARA EL ESTUDIO DE UN VIRUS DE INFLUENZA A DE PERDIZ (Rhynchotus rufescens)

PAREDES ROJAS YESICA ; CALDEVILLA CECILIA; MATIELLO ROSANA; MATTION NORA; IBAÑEZ LORENA ITATÍ

Chascomus, Buenos Aires

Congreso; XV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología ?A 60 AÑOS DE LA DESCRIPCIÓN DE LA ESTRUCTURA DEL ADN?; 2013

Sociedad Argentina de Biología

Objetivo: En el año 2008 se aisló un virus de influenza H1N1 (A/red-winged tinamou/Argentina/MP1/2008) que afectó a perdices en la provincia de Buenos Aires. Las características moleculares de este virus no han sido estudiadas en detalle. El objetivo de este trabajo fue obtener los 8 segmentos del virus por genética reversa, con la intención de generar partículas virales infectivas que permitan realizar estudios específicos de virología molecular y del comportamiento biológico de esta cepa. Métodos: Se utilizó un método de genética reversa cuya primera reacción de PCR utiliza primers que reconocen sitios conservados dentro de la secuencia no codificante de cada gen. Los fragmentos obtenidos se utilizaron como megaprimers en una segunda reacción de PCR, que luego fue tratada con la enzima DpnI y transformada en bacterias DH5alfa. A partir de las colonias se extrajo ADN que fue analizado por restricción con la enzima BglI. Resultados: Para el fragmento correspondiente a la HA se obtuvieron clones positivos que tuvieron el patrón esperado luego del análisis por restricción. En el caso de los fragmentos correspondientes a las proteínas NS, M, NP y NA se han obtenido colonias las cuales se están analizando por restricción. Conclusiones: Se puso a punto el sistema de genética reversa para el clonado del virus de influenza. Hasta el momento se ha podido obtener el plásmido que codifica para la HA de perdiz. Se espera avanzar en la obtención de los demás fragmentos para poder generar partículas virales infectivas que serán estudiadas por técnicas de virología molecular.