Puesta a punto de un sistema de expresión de hemaglutinina recombinante del virus de influenza equina

CALDEVILLA CECILIA; PAREDES ROJAS YESICA; IBAÑEZ LORENA ITATÍ; MATTION NORA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; Jornadas de Veterinaria; 2013

PUESTA A PUNTO DE UN SISTEMA DE EXPRESIÓN DE HEMAGLUTININA RECOMBINANTE DEL VIRUS DE INFLUENZA EQUINA CALDEVILLA C., PAREDES ROJAS Y., IBAÑEZ L.I., MATTION N. ICT-César Milstein CONICET Introducción: la influenza equina (IE) es una enfermedad infecciosa causada por el virus influenza tipo A. Este virus es altamente contagioso y la IE es considerada como la enfermedad respiratoria de mayor importancia económica en las poblaciones equinas. La hemaglutinina (HA) es la principal proteína de la envoltura viral e induce anticuerpos capaces de neutralizar la entrada del virus a la célula. Sin embargo, debido a su alta variabilidad antigénica genera baja reactividad cruzada. Trabajos recientes demuestran la existencia en la HA de epitopes neutralizantes altamente conservados entre las distintas cepas de influenza ubicados en la región del tallo de la proteína, especialmente en el dominio HA2, que pueden ser utilizados para mejorar la reactividad cruzada. Objetivo: diseñar y generar una molécula que contenga solamente la región del tallo de la HA equina, de manera de exponer el dominio conservado HA2 que no se encuentra accesible en la proteína nativa. Expresar dicha proteína y utilizarla como inmunógeno para determinar reactividad cruzada contra diferentes cepas de virus equinos. Materiales y Métodos: la secuencia que codifica para HA (H3N8) (A/Equi/Argentina/93) optimizada para su expresión en E.coli, fue clonada en el vector pET22b. La inducción de la expresión de la proteína se realizó con IPTG 1mM, fue evaluada en diferentes medios de cultivo, a distintos tiempos y temperaturas post-inducción. La expresión en las distintas fracciones se analizó mediante SDS-PAGE y western blot. Resultados: Se demostró la expresión de una proteína de 33 KDa mediante SDS-PAGE y luego su identidad fue confirmada por WB. El tiempo óptimo para la expresión de la proteína fue entre las 3 y 7 h post inducción, no observándose expresión luego de una inducción over night. La proteína recombinante se obtuvo a partir de la fracción insoluble y los mayores niveles de expresión se alcanzaron con el medio Terrific, a 37°C. Conclusiones: se logró optimizar la expresión de la proteína variando las condiciones de tiempo de inducción, temperatura y medio de cultivo. La producción de esta molécula será útil en ensayos de inmunogenicidad en animales (ratones y equinos) a los fines de determinar la reactividad cruzada de anticuerpos contra distintas cepas y/o tipos de virus de influenza A. Asimismo, es relevante destacar que estas estrategias podrían aplicarse en un futuro a la prevención de la influenza en humanos.