Análisis de la expresión de genes en ratones carentes de canales de calcio de tipo P/Q.

LORENA ITATÍ IBAÑEZ; RUPAL DEBA; ENRICO STEFANI; OSVALDO UCHITEL

Mar del Plata

Congreso; CONGRESO CONJUNTO DE SOCIEDADES BIOMEDICAS; 2004

Los canales de Ca++de tipo P/Q median la transmisión sináptica en el sistema nervioso. Laablación génica de este canal genera un animal KO que posee afecciones neurológicasmarcadas. En estos animales la liberación de neurotransmisores está mediada por canales deCa++ de tipo N y R que compensan la falta del P/Q. Sin embargo no está claro si estacompensación se correlaciona con un aumento en los niveles del mRNA o de las proteínascorrespondientes. Por otro lado se sabe que los canales de Ca++ regulan la expresión de variosgenes, por lo que un cambio en los perfiles de expresión de estos canales en el animal KO,podría modificar la expresión de dichos genes.Teniendo en cuenta estos antecedentes, nos propusimos medir los niveles de mRNA de 15genes utilizando la técnica de PCR en Tiempo Real. Cuantificamos canales de Ca++ HVA, LVA,como así también genes regulados por los mismos.El RNA extraído se trató con DNasa para evitar la contaminación del DNA genómico. Lareacción de RT se realizó a 37ºC por 60 min, a partir de 2 μg de RNA total, utilizando comoprimer oligo-dT. La reacción de PCR se realizó utilizando el kit iQTM SYBR Green Supermix en presencia de primers específicos. Los resultados se expresan relativizados a GAPDH.El candidato más obvio para reemplazar la falta del canal P/Q era el canal N, sin embargo noencontramos cambios significativos en la expresión de este canal ni en ningún otro canal HVA.Tampoco vimos diferencias significativas en otros genes relacionados. Sin embargoencontramos un aumento significativo en la expresión de canales LVA en el cerebelo deanimales KO, pero no en el resto del cerebro. Este aumento fue de 2 ± 0.4 veces para elsubtipo G; 4 ± 0.9 veces para el subtipo H y 1.4 ± 0.3 para el subtipo I.La eliminación de canales P/Q no es compensada por la sobreexpresión de otros canales HVA,a menos a nivel del mRNA. El aumento en la expresión de los canales LVA en cerebelo podríarelacionarse con la actividad epileptiforme descripta en este modelo animal.