Mecanismos Endocitóticos y su Relación con el Ciclado Vesicular en Células Cromafines de Ratón Sometidas a Estímulos de Variada Intensidad.

ANDRÉS E. PÉREZ BAY; LORENA I IBAÑEZ; OSVALDO D. UCHITEL,; FERNANDO D. MARENGO

Córdoba

Taller; Taller de Neurociencias; 2004

Los mecanismos por los cuales se recupera la membrana luego de una exocitosis masiva como así también las vías por las que se produce el ciclado de vesículas no están bien definidos en células cromafines. Una herramienta fundamental para el estudio de estos procesos en otros modelos experimentales ha sido el fluoróforo FM1-43, el cual sin embargo, casi no ha sido usado en cromafines. En este trabajo, por medio del uso de esta herramienta, hemos determinado que la célula cromafin es capaz de recuperar totalmente su membrana plasmática luego de estímulos potentes que desencadenan exocitosis masiva, como el provocado por una despolarización por 3´ de exposición a 50mM K+ en presencia de 2mM Ca2+, que provoca la fusión de un equivalente de más del 70% de la membrana plasmática inicial. Sin embargo, para una segunda despolarización mantenida por 20´ bajo las mismas condiciones de K+ y Ca2+,  hemos comprobado que solamente un 32±7% de membrana  se recicla en nuevas vesículas liberables. La marca fluorescente retenida luego de este segundo tratamiento es mantenida en buena medida en corpúsculos fluorescentes localizados y bien delimitados. Estos son similares a los identificados en otros preparados como vacuolas y/o cisternas que se producen a  consecuencia de la llamada bulk endocitosis. De acuerdo a lo propuesto para la endocitosis de tipo bulk, cuando la intensidad del estímulo se redujo marcadamente (0.5 mM Ca2+), las células fueron capaces de reciclar la totalidad de la membrana exocitada en nuevas vesículas liberables, en el marco temporal de nuestros experimentos (24±4 vs 21±3%, n=14).  Estos resultados estarían de acuerdo con la existencia en células cromafines de un mecanismo endocítico que se activaría en condiciones de alta exigencia a fin de mantener la homeostasis en la membrana plasmática, pero que a su vez es incapaz de recuperar el pool liberable de vesículas en un marco temporal relativamente corto. Estos resultados rememoran a la bulk endocitosis previamente descripta en otros preparados como las células bipolares de la retina de goldfish y en cáliz de Held