INVESTIGADORES
IBAÑEZ Lorena Itati
congresos y reuniones científicas
Título:
Un mecanismo endocitótico rápido y otro lento recuperan la membrana en células cromafines de ratón.
Autor/es:
ANDRÉS PÉREZ BAY; LORENA ITATÍ IBAÑEZ; OSVALDO UCHITEL; FERNANDO MARENGO
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Taller; Taller de Neurociencias; 2005
Resumen:
La contribución de los mecanismos endocíticos que recuperan la membrana y generan vesículas liberables luego de una exocitosis masiva no está bien determinada en células cromafines. En este trabajo, por medio del uso del fluoróforo FM 1-43 se determinó que la célula cromafín es capaz de recuperar totalmente su membrana plasmática luego de una exocitosis masiva (> 70% de la membrana plasmática) provocada por una despolarización por 3´ con K+ 50 mM (Ca++ 2mM). Una segunda despolarización bajo las mismas condiciones de K+ y Ca++, solamente exocita el 32"7% del fluoróforo internalizado.La cuantificación de la exocitosis, endocitosis y el ciclado vesicular ante estímulos de diferente duración sugiere la existencia de dos procesos endocitóticos separados temporalmente: uno rápido que se completa en menos de 30 segundos y que sobrecompensa a la exocitosis aunque sólo la tercera parte de la membrana que recupera es capaz de ser liberada dentro de los 50 minutos posteriores; y uno lento que recupera la totalidad de la membrana liberada por la exocitosis, la cual no puede ser liberada nuevamente en su totalidad. Imágenes de microscopía confocal muestran que la fluorescencia remanente al final de los experimentos se distribuye principalmente en puntos grandes y delimitados y en menor medida en áreas difusas. Para identificar si esta fracción de membrana no liberable es recuperada a través de un mecanismo de bulk endocitosis que genere vacuolas y cisternas, se intentó marcar estas posibles estructuras con moléculas fluorescentes de alto peso molecular (Dextranos de 40kD). Este fluoróforo se internalizó mayoritariamente en células que habían perdido su estructura esférica y que se encontraban extremadamente vesiculadas mientras que no logró marcar a las células con características similares a las elegidas comunmente.Finalmente para determinar si la recuperación de membrana ocurrida durante el proceso endocitótico rápido se debe a un mecanismo de kiss and run se intentó inhibir esta vía endocítica con staurosporina. Resultados preliminares no permiten afirmar la presencia de este mecanismo.