Transferencia de canales de calcio por medio de vectores amplicón derivados del Virus del Herpes Simple tipo I

LORENA I. IBAÑEZ; ALBERTO EPSTEIN; OSVALDO UCHITEL

Córdoba

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Neuroquímica; 2006

Los canales de calcio dependientes de voltaje controlan la mayoría de los procesos dependientes de calcio en la célula, incluyendo liberación de neurotransmisor, excitabilidad, plasticidad neuronal, expresión génica, diferenciación y supervivencia neuronales.Los canales de tipo P/Q tienen un alto nivel de expresión en terminales presinápticos y están directamente acoplados a la liberación de neurotransmisor. La eliminación de estos canales induce un rápido y progresivo síndrome neurológico caracterizado por pérdida del balance, ataxia y distonía.En el presente trabajo se recupera la expresión de canales de tipo P/Q en animales que carecen del mismo utilizando como herramienta de transferencia génica vectores amplicón derivados del virus del Herpes Simple tipo I. Estos vectores defectivos tienen la ventaja de no poseer genes virales y de permitir que la mayoría del genoma del virus y el volumen de la cápside puedan ser usados para incorporar grandes cantidades de DNA foráneo. La secuencia transgénica clonada en el plásmido amplicón pAEUA-2, codifica para la variante D47 del canal de calcio P/Q de humano. Estos plásmidos expresan además el gen de la proteína fluorescente verde (GFP) la cual se utiliza para la determinación de la expresión del plásmido. El análisis de la expresión del transgen se realizó por técnicas de PCR en tiempo real, inmunofluorescencia y western blot. La capacidad de la secuencia clonada para producir corrientes de calcio bloqueables por la toxina w-Aga, específica para canales de calcio de tipo P/Q, se determinó por medio de experimentos de patch clamp en líneas celulares.