L-arabinose isomerase de Enterococcus faecium: expressão, obtenção e purificação

DE SOUZA, MARYLANE; MANZO, RICARDO; MAMMARELLA, ENRIQUE; GARCIA, JOSÉ; PESSELA, BENEVIDES; GONÇALVES, LUCIANA

Fortaleza

Simposio; XX Simpósio Nacional de Bioprocessos - SINAFERM y XI Simpósio de Hidrólise Enzimática de Biomassas - SHEB; 2015

Associação Brasileira de Engenharia Química - ABEQ

O objetivo do presente trabalho é a fermentação e obtenção de extratos enriquecidos em L-arabinose isomerase (L-AI), para isomerização de D-galactose em D-tagatose, um substituto do açúcar em alimentos. O gene que codifica a (L-AI) de Enterococcus faecium foi clonado e expresso em Escherichia coli DH10B e BL21, utilizando dois diferentes plasmídeos comerciais PET29a e pBAD. O plasmídeo pET29a conferiu à proteína de interesse a fusão de uma cauda de seis histidinas na extremidade do C-terminal, enquanto o plasmídeo pBAD foi construído com uma sequência de seis histidinas localizadas na região do N-terminal, favorecendo nos ensaios de purificação. Ensaios de expressão foram estudados visando o aumento da concentração da enzima (L-AI), utilizando-se como meio de cultivo o LB (Luria-Bertani). A proteína recombinante produzida foi purificada com sucesso, em um único passo, por cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (Immobilized Metal-Ion Affinity Chromatography ? IMAC).