Ensayos preliminares para la producción y purificación parcial de una L-arabinosa isomerasa de Lactococcus lactis subsp. lactis CRL63

MANZO, RICARDO; TORRES, PEDRO; RUBIOLO, AMELIA; BATISTA-VIERA, FRANCISCO; MAMMARELLA, ENRIQUE

Foz de Iguazú, Paraná

Congreso; XVIII Congresso Brasileiro de Engenharia Química; 2010

Associaçao Brasileira de Engenharia Química - Universidade Estadual de Maringá - Universidade Estadual de Campinas

Se desarrollaron cultivos de 29 cepas bacterianas con L-arabinosa como fuente principal de carbono. De todas ellas, fue seleccionada la cepa Lactococcus lactis subsp. lactis CRL63 para desarrollar este trabajo. Una suspensión bacteriana en fase exponencial tardía de crecimiento se agregó a un medio MRS modificado. Luego del lisado y centrifugado, el extracto obtenido se precipitó agregando (NH4)2SO4 hasta un 80% de saturación. El pellet fue redisuelto, gel filtrado y aplicado a una columna con DEAE-Sepharose. La actividad L-arabinosa isomerasa fue ensayada empleando D-galactosa como sustrato; la D-tagatosa producida se determinó por el método de Dische. La fracción con mayor actividad específica fue aplicada en una resina QAE-Sephadex, obteniéndose dos fracciones con actividades de 2,9x10-3 μmol min-1 mg proteína-1 y 5,6x10-3 μmol min-1 mg proteína-1, 30 y 40 veces más purificadas que el precipitado gel filtrado. La pureza y el peso molecular de la enzima fueron estimados por SDS–PAGE.