Optimización de un Ensayo de Inmunoaglutinación para Diagnosticar Infección por Tripanosoma cruzi

GONZALEZ, V. D. G.; GARCIA, V. S.; VEGA, J. R.; MARCIPAR, I. S.; GUGLIOTTA, L. M.

Santa Fe

Jornada; XXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología, SAP2009; 2009

Sociedad Argentina de Protozoología

Los látex de inmunodiagnóstico se han utilizado exitosamente para la detección de embarazo, artritis reumatoidea, toxoplasmosis, malaria, brucelosis, leptospirosis, entre otras. En el desarrollo de estos reactivos, partículas de látex monodispersas se sensibilizan con los antígenos (o anticuerpos) de interés, de manera tal que ante la presencia de anticuerpos (o antígenos) específicos en un fluido humano, se produzca la aglutinación de las mismas. La detección de la inmunoaglutinación se puede realizar visualmente o mediante métodos instrumentales, como turbidimetría, nefelometría, y dispersión de luz dinámica. El método resultante es rápido, de fácil realización, de bajo costo, y permite la automatización del mismo. El desarrollo de un kit de diagnóstico basado en la aglutinación de látex básicamente se puede dividir en cuatro etapas: I) la síntesis controlada de las partículas de látex; II) la caracterización de los látex producidos, que comprende la determinación de tamaños medios de partículas y su distribución, así como también su caracterización superficial; III) la sensibilización de las partículas de látex con las proteínas antigénicas de interés; y IV) la prueba de los complejos látex-proteínas en ensayos de inmunoaglutinación. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos en la etapa de aplicación de los complejos látex-proteína en ensayos de inmunoaglutinación para diagnosticar la Enfermedad de Chagas. En primer lugar, los ensayos se realizaron empleando látex carboxilados sensibilizados con diferentes proteínas antigénicas del T.cruzi (homogenato del parásito y dos proteínas recombinantes: Ag36 y CP1) y bajo diferentes condiciones de reacción (buffer de alta y baja fuerza iónica, y con el agregado de agentes bloqueantes y/o emulsificantes). El seguimiento de la reacción se realizó por espectrofotometría UV-Vis a 570 nm. Se observó que los látex sensibilizados con CP1 mostraron mayor sensibilidad para la detección de anticuerpos anti-T.cruzi a baja fuerza iónica, tanto en presencia de un agente bloqueante como de un emulsificante. Posteriormente se procedió a la evaluación del reactivo, comparativamente con las reacciones serológicas clásicas. Para ello se estudiaron 80 sueros, a los que se les efectuaron las técnicas de ELISA y HAI. Sobre 50 sueros positivos para las dos reacciones serológicas, 48 fueron positivos para la reacción de aglutinación del látex (96%) y 2 negativos (4%). Sobre 50 sueros negativos para las dos reacciones serológicas, 16 fueron positivos (32%) y 34 negativos (68%). Es decir que, considerando este lote de sueros, la sensibilidad comparada del método fue del 96 % y su especificidad fue del 68%. El bajo valor de especificidad obtenido se debe a la influencia de la consistencia de las muestras de suero en las medidas de absorbancia, por lo que se continuará trabajando de manera de encontrar las condiciones de reacción que mejoren los resultados del ensayo.