Nuevo Monómero y Síntesis de Nanopartículas Fluorescentes: Aplicación en Microscopía Confocal

FEMIA, A. LIS; GONZALEZ, VERÓNICA; GUGLIOTTA, LUIS

Mar del Plata

Simposio; XV Simposio Argentino de Polímeros y I Congreso Argentino de Materiales Compuestos; 2023

Universidad Nacional de Mar del Plata

Las nanopartículas fluorescentes se encuentran en un creciente auge de aplicación en el área de medicina e imagen. La fluorescencia de las mismas habilita su uso tanto en microscopía confocal y/o de fluorescencia, como en citometría de flujo. Ambas técnicas permiten optimizar métodos de diagnóstico, identificar funciones celulares y/o moleculares, analizar el impacto ambiental de los plásticos y microplásticos, así como obtener imágenes de organelas y estructuras celulares o subcelulares. Esto impulsa el desarrollo de nuevas opciones de mercado, que deben proveer cada vez más y mejores partículas con fluoróforos estables y de mayor intensidad de brillo.En este trabajo presentamos la síntesis de partículas de látex, utilizando un nuevo monómero obtenido a partir de fluoresceína y glicidil metacrilato (F-GMA). La misma se realizó por terpolimerización en emulsión de estireno, ácido metacrílico y F-GMA. Finalizada la síntesis, las partículas fueron caracterizadas analizando su tamaño (dispersión de luz dinámica), carga neta (potencial Z), concentración de grupos carboxilo (por conductimetría), eficiencia de conversión (gravimetría), incorporación de fluoróforo (F %, espectrofotometría UV-Vis), intensidad de emisión fluorescente (espectrofotometría de fluorescencia), estructura molecular (espectrometría de infrarrojo). Los resultados de la caracterización de 3 látex sintetizados, R1 (sin fluorescencia), R2 (fluorescente, con F) y R3 (fluorescente, con F-GMA) se muestran en la Tabla 1.Las partículas obtenidas, lavadas y mantenidas en asepsia, se utilizaron en un ensayo de marcación celular. Para ello, se purificaron células mononucleares de circulación periférica, a través de gradiente de glicerol. Una vez obtenidas las células, se ubicaron alícuotas de una suspensión en una placa de 12 pocillos, a una concentración de 1.104 células. Luego se adicionaron las partículas fluorescentes diluidas en medio de cultivo. Se ensayó como control células sin partículas y células con partículas sin fluoróforo. Al cabo de 24 hs se pudo observar las células en microscopio confocal, confirmándose la presencia de emisión fluorescente en las células.En conclusión, se han obtenido partículas fluorescentes funcionalizadas, aptas para unión covalente de proteínas y otras biomoléculas, que pueden ingresar al interior de las células, manteniendo su propiedad fluorescente. Nuevos y futuros trabajos serán necesarios para corroborar su aplicabilidad en ensayos de citometría de flujo, kits de diagnóstico, etc.