LA RADICALIZACION DEL ADN GENOMICO POR HIPOCLORITO EN LOS SITIOS DE INFLAMACION NEUTROFILICA CAUSA MUTACIONES

LÓPEZ C M; VELAZQUEZ VELAZQUE, V ; RICHARD M B; RAMIREZ D C; GÓMEZ MEJIBA S E

san luis

Jornada; JORNADAS DE INVESTIGACION EN CIENCIAS DE LA SALUD; 2023

LA RADICALIZACION DEL ADN GENOMICO POR HIPOCLORITO EN LOS SITIOS DE INFLAMACION NEUTROFILICA CAUSA MUTACIONESLópez C M¹, Velazquez Velazque, V I¹, Richard M B¹, Ramirez D C², Gómez Mejiba S E¹¹ Laboratorio de Terapéuticas y Nutrición Experimental, IMIBIO-SL CONICET cristofermlopez.1@gmail.com ² Laboratorio de Medicina Experimental y Traduccional, IMIBIO-SL CONICET sandraegomezmejiba@yahoo.com La inflamación neutrofílica (IN) ha sido involucrada en la patogénesis de los agudos y crónicos. La inflamación neutrofílica es la acumulación, retención y activación de los neutrófilos en un sitio de injuria (Gomez Mejiba & Ramirez, 2020). Los neutrófilos contienen gránulos azurófilos que contienen mieloperoxidasa (MPO). La MPO es la única enzima que, bajo condiciones fisiológicas, puede producir acido hipocloroso o hipoclorito (HOCl) (Klebanoff, 2005). HOCl que puede dañar cualquier macromolécula de forma inespecífica. Estas modificaciones oxidativas dañan la estructura y la función de dichas macromoléculas. Daños al ADN genómico puede traducirse en un proceso de replicación alterado lo cual produce mutaciones que, si no son reparadas, puede conducir a la transformación celular lo cual conduce a la formación de un tumor (Gungor et al., 2010). Sin embargo, hasta el momento no ha sido demostrado que un radical libre centrado en el ADN esté involucrado en el proceso de oxidación del ADN y consecuentemente en el proceso de mutagénesis. En el presente estudio nos proponemos usar modelos bioquímicos y celulares para demostrar el rol de la radicalización al ADN causados en modelos de IN en el proceso de mutagénesis. Para lo cual estudiamos la radicalización del ADN por HOCl usando la técnica de inmuno-spin trapping, IST (Gomez-Mejiba & Ramirez, 2019) en modelos de IN, incluyendo la exposición del ADN aislado, células HL-60 (sobre expresan MPO) y en la línea celular A549 cargadas con MPO humana, al HOCl agregado directamente o generado intracelularmente, respectivamente. Usando estos modelos y la técnica de IST para detectar radicales libres centrados en el ADN demostramos que HOCl puede radicalizar el ADN. Esta radicalización, como así también la formación de 8-oxo-deoxiguanosina (8-oxo-dGuo, uno de los productos de oxidación del ADN (Hawkins & Davies, 2002)) fue prevenida por la adición de un scavenger de HOCl (resveratrol) o por inhibición de la MPO con ABAH-inhibidor de MPO. Interesantemente, la generación intracelular de HOCl en células A549 cargadas con MPO activa produjo la mutagénesis del gen de la enzima hidroxifosforobosil transferasa (ensayo de selección con 6-tioguanina). Este efecto, como así también la producción de 8-oxo-dGuo fueron prevenidos mediante el uso de resveratrol o mediante el atrapamiento de radicales centrados en el ADN con la nitrona 5,5-dimetil-1-pirrolina N-oxido (DMPO). Estos datos indican que la generación de HOCl por MPO en células cercanas a sitios de IN puede conducir a mutagénesis. PROICO 100218/ 023418/ PROICOS 2023 / PICT2021-I-A-00147 / PUE-IMIBIO-SL.Palabras claves: inflamación neutrofílica-MPO-radicales centrados en ADN-mutagénesis