MODULATION OF IL-10R EXPRESSION IN PRIMARY TUMOR AND METASTATIC CELLS OF A RAT B CELL LYMPHOMA (L-TACB)

RICO, MJ; MATAR, P; CACHERO, S; ARMAS, P; BONFIL, RD; GALLO CALDERÓN, MARINA; CALCATERRA, N; SCHAROVSKY, OG

Sede de Gobierno de la Universidad Nacional de Rosario

Congreso; V Congress and XXII Annual Meeting of the ROSARIO BIOLOGY SOCIETY; 2002

XXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario

La IL-10 es una citoquina Th2 con capacidad supresora producida por distintos tipos celulares normales y tumorales. Previamente demostramos que las ratas e portadoras de L-TACB presentan niveles séricos elevados de IL-10 y una marcada inhibición de la linfoproliferación. La IL-10, producida por los linfocitos T, fue el principal factor responsable de dicha inhibición. Posteriormente, se vio que la IL-10 era producida en cantidades abundantes por las células metastásicas en cultivo, mientras que las células tumorales primarias no producían cantidades detectables de esta citoquina. Realizando un ELISA celular (CELISA) se comprobó que las células metastásicas expresan receptor de IL-10 (IL-10R), en una cantidad significativamente superior a la de las células tumorales primarias. También se determinó que IL-10 incrementa la tasa de proliferación in vitro de las células metastásicas de un modo dosis dependiente, pero no afecta la de las células tumorales primarias. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la expresión de IL-10R tanto a nivel proteico, celular y subcelular, como de su ARN mensajero (ARNm) en células L-TACB de tumor primario y de metástasis. Se trabajó con ratas endocriadas e que fueron desafiadas con L-TACB, vía s.c. Luego de 15 a 20 días se extirparon el tumor primario y las metástasis ganglionares de cada animal. Se extrajo ARN total de todas las muestras y de bazo de portador de tumor (control positivo) y riñón normal (control negativo). Se realizó una RT-PCR semicuantitativa para determinar la cantidad de ARNm para IL-10R. La RT-PCR mostró que las células del tumor primario y de las metástasis no difieren en la cantidad de ARNm para IL-10R. A partir de muestras de tumor primario y metástasis se prepararon homogenados proteicos totales y se separaron las fracciones citosólica y de membrana. Se determinó la presencia de la proteína en todas las muestras y fracciones mediante Western blot. La cantidad de IL-10R presente en la fracción proteica total de las metástasis fue aproximadamente el doble que la de los tumores primarios. Las fracciones citosólicas y de membrana de las metástasis presentaron bandas más intensas que las de los tumores, siendo mayor la diferencia entre las de membrana. Se concluye que: 1) La regulación de la expresión del receptor de IL-10 se produciría a nivel post-transcripcional dado que la cantidad de ARNm es similar en ambos tipos celulares. 2) El nivel de traducción de IL-10R está incrementado en las células metastásicas. 3) Existe concordancia entre los resultados obtenidos previamente por CELISA y los actuales por Western blot. 4) La modulación positiva de la expresión de IL-10R en el linfoma L-TACB formaría parte de la transición del fenotipo tumoral al metastásico