INVESTIGADORES
GALLO CALDERON marina beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
CONSTRUCCIÓN DE BIBLIOTECAS INMUNES DE NANOANTICUERPOS (O VHHs) Y SELECCIÓN DE ANTICUERPOS ESPECIFICOS CONTRA LA CEPA O1/CAMPOS DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA PARA APLICACIÓN DIAGNÓSTICA
Autor/es:
JOAQUIN BOZZO; DE NICOLA, JEANETTE; GALLO CALDERON, MARINA; MATTION, NORA; VANINA GRIPPO
Reunión:
Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2016
Resumen:
La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral del ganado, altamente contagiosa y de graves repercusiones económicas. Existen siete serotipos del Virus de la FA (VFA): O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 y Asia1; habiendo los tres primeros circulado en Argentina. El desarrollo de métodos diagnósticos innovadores que respondan a las necesidades del control de la FA es de gran interés debido a la elevada variabilidad que presenta el virus, la facilidad de contagio y la susceptibilidad de especies de interés económico. Por otro lado, los anticuerpos (Acs) de dominio único derivados de camélidos (VHHs o Nanoanticuerpos) representan una herramienta novedosa con características únicas en comparación con los Acs convencionales. Se caracterizan por su alta especificidad, estabilidad, afinidad por el blanco y reducido tamaño, lo que permite fijar mayor densidad de Acs incrementando notablemente la sensibilidad diagnóstica.El objetivo de este trabajo fue construir bibliotecas inmunes de VHHs y seleccionar Acs específicos contra la cepa O1/Campos (O1C) del VFA para su posterior aplicación en la innovación diagnóstica.Se inmunizaron dos llamas con la cepa O1C y la respuesta inmune inducida fue medida por ELISA en fase líquida. Se observó un aumento de la respuesta humoral a lo largo del esquema de inmunización, alcanzando títulos muy altos (valores entre 4 y 5 para las llamas S y B, respectivamente). A partir de linfocitos de sangre total periférica de las llamas inmunizadas, se construyeron dos bibliotecas de Nanoanticuerpos en el vector fagémido pHEN4. Ambas bibliotecas superaron los controles de calidad confirmándose la presencia del inserto VHH completo en un alto porcentaje de clones (>95%) y la diversidad del repertorio VHH clonado, habiéndose determinado por PCR y digestión enzimática, respectivamente. Partiendo de estas bibliotecas inmunes, se seleccionaron fagos que expresaron en su superficie VHHs específicos contra la cepa O1C por la metodología de ?Phage Display?. Se obtuvo un elevado enriquecimiento, hasta 100 veces en la primera y 100.000 veces en la segunda ronda de selección, en fagos que reconocieron específicamente esta cepa viral. A su vez, se evaluó la reactividad específica de estos fagos seleccionados por ELISA, evidenciándose un aumento a lo largo de la rondas de selección en comparación a la reactividad específica de los fagos de la biblioteca total. Por último, se observó que 137 de 182 clones seleccionados y expresados en forma soluble reconocieron específicamente la cepa O1C por ELISA.En conclusión, se construyeron dos bibliotecas de Nanoanticuerpos derivadas de llamas inmunizadas con la cepa O1C del VFA. A partir de las mismas, se seleccionaron VHH específicos contra esta cepa por la metodología de ?Phage Display?. Finalmente, se obtuvo un alto número de clones positivos quereconocieron específicamente la cepa O1C en ELISA, con potencial uso en aplicaciones múltiples entre ellas, la innovación diagnostica de esta infección viral.