INVESTIGADORES
GALLO CALDERON marina beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
EL ANALISIS COMPARATIVO DE LAS SECUENCIAS DE UN FRAGMENTO DE LA PROTEINA DE FUSION DEL VIRUS DISTEMPER CANINO PERMITE LA DIFERENCIACION ENTRE CEPAS SALVAJES Y VACUNALES
Autor/es:
CARINA ROMANUTTI; MARINA GALLO CALDERON; LETICIA KELLER; NORA MATTION; JOSE LA TORRE
Reunión:
Jornada; Jornadas Argentinas de Microbiologia; 2014
Institución organizadora:
Asocacion Argentina de Microbiologia
Resumen:
Introducción. El Virus Distemper Canino (VDC) es altamente contagioso y afecta a cánidos domésticos y salvajes. Las vacunas a virus vivo modificadas desarrolladas en los ?60 lograron controlar la enfermedad, pero recientemente se han registrado a nivel mundial y en Argentina un aumento de casos de VDC tanto en animales vacunados como en no vacunados. En el ICT Milstein se realiza hace años, el diagnóstico molecular del VDC, entre otros patógenos caninos, el cual consta de una amplificación por RT-PCR de un fragmento del gen de la Nucleoproteína (NP). Sin embargo, la secuencia de este fragmento no permite la diferenciación de cepas salvajes con respecto a cepas vacunales. Para poder establecer relaciones evolutivas entre las cepas de VDC, es necesario analizar los genes codificantes para la Hemaglutinina (H) y la proteína de Fusión (F). Si bien el gen de la H es el más variable, su amplificación (incluso en fragmentos pequeños) suele ser dificultosa. Por otro lado, se desconocen las secuencias del gen de la F en cepas argentinas. El objetivo del trabajo fue evaluar en cepas locales, la variabilidad genética de la secuencia completa del gen de la F, con respecto a cepas vacunales y a su vez, definir una región sub-génica que pueda ser utilizada con fines diagnósticos, permitiendo la diferenciación de cepas vacunales y salvajes. Materiales y métodos. Se amplificó por RT-PCR el gen completo de la F de 15 muestras de sangre de animales con diagnóstico positivo para VDC. Los fragmentos fueron clonados en el vector pGEMT-easy y secuenciados. Además, se amplificó por RT-PCR un fragmento de 558 pb, incluido en el gen de la F, a partir del ARN extraído de 13 muestras. Los productos obtenidos se secuenciaron directamente y se realizó el análisis de las secuencias. Resultados. Se alinearon las secuencias aminoacídicas correspondientes al gen completo de la proteína F de las cepas argentinas junto con la cepa vacunal Onderstepoort y otras cepas salvajes internacionales. La mayor cantidad de cambios (46 cambios) estuvo presente en la región correspondiente al pre-péptido, seguido por la región F1 (15 cambios) y por último la región F2 (2 cambios). Con respecto al fragmento de 558 pb, que abarca 238 pb de la región F2 y 320 pb de F1, el mismo pudo ser utilizado con fines diagnósticos, distinguiendo muestras positivas de negativas (en coincidencia con los resultados obtenidos con la NP) y a su vez permitió, luego del análisis filogenético, la diferenciación de cepas vacunales y cepas argentinas, las cuales formaron un único clado. Conclusiones. Se estableció una región sub-génica dentro de la proteína F del VDC que pudo ser utilizada tanto para fines diagnósticos como para diferenciar cepas salvajes y vacunales. Esta región no presentó ninguna dificultad en su amplificación, y otorga la ventaja adicional del secuenciamiento directo (evitando el clonado) permitiendo de una manera más rápida y económica el diagnóstico y diferenciación entre cepas.