PRIMER AISLAMIENTO DE UNA CEPA SALVAJE DE VIRUS DISTEMPER CANINO EN ARGENTINA

CARINA ROMANUTTI; KELLER, LETICIA; BOADO, LORENA; LA TORRE, JOSE; GALLO CALDERON, MARINA

Congreso; Congreso Argentino de Virologia; 2017

PRIMER AISLAMIENTO DE UNA CEPA SALVAJE DE VIRUS DISTEMPER CANINO EN ARGENTINA Romanutti, C., Keller, L., Boado, L., La Torre, J.?, Gallo Calderón, M. Instituto de Ciencia y Tecnología Dr. Cesar Milstein, CONICET, Buenos Aires, ArgentinaIntroducción: El Virus Distemper Canino (VDC), (género Morbillivirus, familia Paramyxoviridae) afecta a animales de compañía y a distintas especies silvestres. En los años ´60s, se desarrollaron vacunas atenuadas que controlaron la enfermedad, pero recientemente se han registrado a nivel mundial y en Argentina, un aumento de casos de DC tanto en animales vacunados como en no vacunados. La variabilidad en los genes codificantes para la Hemaglutinina (H) y la proteína de Fusión (F), estaría relacionada con el incremento de la incidencia del VDC y permite establecer relaciones evolutivas entre las cepas circulantes. En el ICT Milstein se realiza desde hace más de 14 años, el diagnóstico molecular del VDC, entre otros patógenos caninos, el cual nos permite contar con muestras clínicas, conteniendo las cepas circulantes.El objetivo del trabajo fue obtener el primer aislamiento de una cepa salvaje del VDC en nuestro país, estudiar su comportamiento in vitro, y caracterizarla a nivel molecular.Materiales y Métodos: En el año 2005, fue remitida al instituto, una muestra de sangre proveniente de un perro de 4 meses de edad, vacunado, con síntomas característicos de DC. Luego de confirmar el diagnóstico positivo (RT-PCR de un fragmento de 287 pb de la NP), se obtuvieron las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante un gradiente de Ficoll-Hypaque. Con ellas se infectaron células B95a, Vero y VeroSLAM, y se analizó por RT-PCR la presencia de VDC. Además, se realizaron ensayos de IPA y WB con un mAb anti-NP. Por último, se tituló un tercer pasaje (#3).Resultados: Se obtuvo amplificación de la NP sólo en células B95a y VeroSLAM. En esta última línea celular, además se observó el típico efecto citopático (formación de sincicios) y se confirmó la replicación viral, mediante un IPA y un WB. Al aislamiento se lo denominó ?Arg 24? y el título del #3 fue de 3.86x104 DICT50/ml. Con este inóculo, se infectaron células VeroSLAM (moi 0.01) para estudiar la cinética de crecimiento. A distintos tiempos post infección, se tomaron, tanto el sobrenadante como el virus asociado a células y se titularon ambas fracciones. Se observó un título máximo de virus asociado a células (entre las 24 y 32 hpi) de 1x105 DICT50/ml y en sobrenadante (48 hpi) de 1.7x103 DICT50/ml.Luego se estudió la variabilidad de los genes H y F de Arg 24. La comparación de las secuencias aminoacídicas mostraron entre un 89.7-90,6% de identidad con respecto a la cepa vacunal. El gen de la H de Arg 24, contiene 4 sitios potenciales de N-glicosilación adicionales a los de la cepa vacunal y el gen F posee sólo un sitio adicional. El análisis filogenético (de la H y la F) reveló que Arg 24, pertenece al mismo clado que otras cepas argentinas analizadas previamente, y se encuentra distante al clado vacunal. Conclusiones: El estudio del comportamiento biológico in vitro, y el análisis molecular, permitió obtener y confirmar por primera vez en Argentina, el aislamiento de una cepa salvaje de VDC.