DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE PATÓGENOS VIRALES CANINOS

MARINA GALLO CALDERON; CARINA ROMANUTTI; LETICIA KELLER; NORA MATTION; JOSE LA TORRE

Buenos Aires

Congreso; Congreso Nacional AVEACA y XI Congreso Iberoamericano FIAVAC; 2014

Asociacion de Veterinarios de Animales de Compañia

Introducción: Las Gastroenteritis Virales en perros, son causadas principalmente por: Parvovirus (PVC), Coronavirus (CVC), Rotavirus (RVC) y Virus Distemper canino (VDC). Las enfermedades infecciosas del tubo digestivo, junto con las enfermedades respiratorias, como las producidas por el Adenovirus canino-2 (AVC-2) ó el Herpesvirus Canino, (CaHV-1), son las entidades clínicas más frecuentes y temibles en los criaderos caninos. El principal problema de estas enfermedades, radica en la dificultad para realizar el diagnóstico diferencial. Los signos clínicos de la infección por CVC pueden variar mucho, lo cual dificulta el diagnóstico. La acción patógena del RVC es semejante a la del CVC viéndose afectadas las células epiteliales apicales de las vellosidades intestinales. El AVC-2 causa laringotraqueitis y el diagnóstico, se basa en técnicas que son laboriosas y consumen mucho tiempo. El CaHV-1, causa una enfermedad hemorrágica mortal en cachorros, abortos e infecciones del tracto respiratorio superior y de la mucosa externa del aparato genital, en adultos. Los casos clínicos producidos por este virus pueden ser mal diagnosticados como si fueran producidos por parvovirus ó coronavirus. Por la severidad de las enfermedades anteriormente citadas y el impacto que producen en la salud animal, es que se hace imprescindible, la aplicación de técnicas rápidas, específicas y sensibles que permitan la identificación inequívoca del patógeno actuante en cada caso, para obtener el diagnóstico diferencial. Al contar ya en nuestro laboratorio con el servicio de detección molecular para VDC y PVC, el objetivo de este trabajo, fue el desarrollo de la metodología necesaria para la identificación de otros cuatro patógenos virales (CVC, RVC, AVC-2, CaHV-1), utilizando una plataforma de diagnóstico molecular. Materiales y Métodos: con el objeto de evaluar la efectividad y de ajustar los parámetros de ejecución, de las técnicas de PCR y RT-PCR para la detección de los diferentes patógenos virales, se analizaron vacunas comerciales (Coronavirus y Adenovirus), cultivos celulares infectados (Rotavirus) y preparados de necropsias previamente diagnosticadas por inmunofluorescencia (Herpesvirus). La extracción de ADN se realizó con un sistema de adsorción de ácidos nucleicos a partículas de sílica (QiaexII, Qiagen®). La extracción de ARN se realizó con TRIZOL. Para las reacciones de PCR y RT-PCR, se utilizaron primers que reconocen secuencias génicas específicas de cada virus. Resultados: se pudieron detectar los fragmentos génicos esperados, tanto en las vacunas comerciales analizadas, como en los cultivos celulares infectados con los diferentes virus. Para el AVC-2, se amplificó por PCR un fragmento de 1030 pares de bases (pb) del gen E3 y para el CaHV-1, un fragmento de 493 pb del gen TK. Para el caso de CVC y RVC se amplificaron por RT-PCR fragmentos de 409 pb del gen M y 1062 pb del gen 9, respectivamente. Discusión: Para el diagnóstico de CVC y RVC, se analizará materia fecal y un lavado traqueobronquial ó un hisopado nasal u ocular, para el diagnóstico de AVC-2. Si el animal está muerto, se obtendrán necropsias ó materia fecal. Para el diagnóstico del CaHV-1, se tomarán hisopados de la mucosa ocular, y/o genital y en el animal muerto, se tomarán muestras de órganos. Las muestras, deberán ser colocadas en un tubo estéril, enviarse a 4°C y serán acompañadas por una ficha clínica que incluye información específica de cada animal. Conclusiones: En este trabajo, se muestran los resultados preliminares de la puesta a punto de la metodología para detectar a nivel molecular, diferentes patógenos virales. Se dispone así de una batería de diagnósticos rápidos, específicos y sensibles que permiten dilucidar la etiología de las principales enfermedades virales caninas.