CARACTERIZACIÓN GENÓMICA DE TRIGO TRANSGÉNICO (Triticum aestivum L.) UTILIZANDO HIBRIDACIÓN IN SITUFLUORESCENTE(FISH)?.

AUTERI, MICOL; GARIBOTTO, MD; NIEVES, MARIELA; FRADKIN, MAIA; GIARDINI, M.CECILIA; FACCIO, PD; BEZNEC, AD ; BOSSIO, EZEQUIEL

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Genetica; 2019

La técnica de FISH permite identificarcromosomas y/o detectar segmentos cromosómicos mediante el uso de sondas de secuencias cortas de ADN. Dada suprecisión, esta técnicasurge como opción para la caracterización de inserciones de transgenes en trigos genéticamente modificados, en reemplazo delSouthernblot. El objetivo de este trabajo fue establecer un protocolo de FISHpara la detección específica de transgenes insertos en plantas de trigo.En este trabajo se utilizaron dos genotipos transgénicos y unowild type. Se evaluaron 3 protocolos para la obtención de preparados cromosómicos.De los tres, el tercero, donde se utiliza una mezcla de enzimas, permitió obtener metafases mitóticas óptimas, sin cromosomas superpuestos, sin pared celular ni restos de citoplasma.Sobre éstos se evaluaron 4 protocolos de hibridación que combinaban una sonda específica sobre el transgén con una sonda control sobre una secuencia endógena. Con el Protocolo3 se lograron hibridacionesespecíficassobre los transgenes y sobre la secuencia control, en ambos genotipos transgénicos.Se determinó el número de inserciones del transgénen cada genotipo, observando dos señales de la sonda paraTR1 y diez para TR4, así como la localización cromosómica de los mismos. Los resultados avalan el reemplazode la laboriosatécnica SouthernBlot por la de FISH.