Ventajas de una línea celular de primate, Cebus apella paraguayanus, en aplicaciones biotecnológicas

NIEVES, MARIELA; RIVOLTA, MIGUEL; MUHLMANN, MARÍA C.; MUDRY, MARTA D.

Malargüe, Mendoza

Congreso; XXXIII Congreso Argentino de Genética; 2004

Sociedad Argentina de Genética

En caracterizaciones citogenéticas de aplicación diagnóstica para taxonomía animal suele ser imprescindible el cultivo de tejidos, ya que, la calidad de los preparados cromosómicos es considerablemente superior a la de los obtenidos por cultivo de linfocitos de sangre periférica (LSP). En este contexto, se describen las etapas utilizadas para obtener una línea celular de Cebus apella paraguayanus (Platyrrhini: Ceboidea) por cultivo de explanto (tejido dérmico de oreja) y cultivo de fibroblastos en monocapa (biopsia de tejido subcutáneo de muslo) de distintos ejemplares. Se utilizó medio de cultivo MEM Eagle, Suero Fetal Bovino al 15% y antibiótico Baytril al 0.1%, en estufa gaseada a 37ºC según método standard. Si bien el cultivo por explanto no prosperó, se logró el cultivo primario de fibroblastos. El desarrollo de la línea se controló cada 48hs por coloración del medio, densidad y morfología celular, en microscopio de contraste de fases. Se realizaron 4 repiques con tripsina al 0.3% durante 15 minutos a 37ºC.  Los cultivos crecidos durante 3 meses fueron sometidos a 4hs de colcemida, tripsinizadas y fijados citogenéticamente. Las metafases extendidas en cubreobjetos fueron sometidas a la técnica de bandas G a fin de microdisecar el cromosoma 11 y generar una sonda para Hibridación In Situ fluorescente (FISH). Si bien se microdisecó tanto a partir de LSP como de fibroblastos, sólo se obtuvo la sonda con metafases provenientes de la línea celular. La especificidad de la sonda deseada se verificó en 3 ejemplares de la misma especie por FISH.