CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

La enfermedad de Chagas es una parasitosis endémica en América Latina causada por el protozoo Trypanosoma cruzi. Las terapias actuales son altamente tóxicas y de limitada eficacia por lo que existe una necesidad de identificar blancos para el desarrollo de nuevas terapias tripanocidas.Las vitaminas son micronutrientes esenciales para todas las células vivas; muchos organismos las sintetizan de novo mientras que otros las obtienen del medio a través de transportadores específicos. Evidencias del transporte de riboflavina (vitamina B2) y sus efectos en la biología de T. cruzi fueron reportados previamente por nuestro grupo de trabajo. El pantotenato (vitamina B5) es precursor de la coenzima A, involucrada en numerosas reacciones celulares esenciales.Análisis bioinformáticos sugieren que T. cruzi no sintetiza pantotenato de novo. Dada su relevancia en distintos tipos celulares, el objetivo del trabajo fue determinar el rol del pantotenato en T. cruzi e identificar sus potenciales transportadores.La tasa de proliferación de epimastigotes de T. cruzi de la cepa Y, evaluada por curvas de crecimiento y MTT, fue significativamente disminuida en medios de cultivo en ausencia o con baja concentración de pantotenato. Este efecto antiproliferativo fue revertido con el agregado de pantotenato en forma dependiente de la concentración. En contrapartida, el efecto proliferativo de pantotenato no fue observado en otros tripanosomátidos como T. brucei, L. mexicana y C. fasciculata.A través de análisis in silico, identificamos un potencial transportador de pantotenato (TcPPT1) que presenta características estructurales descriptas para otras permeasas de T. cruzi. A partir de ADN de epimastigotes de la cepa Y, se amplificó el TcPPT1, se clonó en el vector de expresión p-Trex, y se construyó una cepa de T. cruzi que sobreexpresa TcPPT1 fusionado a mCherry (proteína fluorescente roja). La expresión de TcPPT1 y mCherry fue confirmada por PCR, RT-PCR y microscopía de fluorescencia. Resultados preliminares mostraron un ligero aumento en la proliferación de epimastigotes transgénicos en medios con bajas concentraciones de pantotenato.Esta cepa sobreexpresante será utilizada para caracterizar, en comparación con la cepa control, el rol de TcPPT1 en la proliferación de los epimastigotes, metaciclización y amastigogénesis así como su localización subcelular.Una caracterización más profunda de este transportador permitirá evaluar su condición como potencial blanco terapéutico.

enviar mensaje